Vanin-1基因在免疫性血小板減少癥中的表達及意義.pdf

1、目的:免疫性血小板減少癥(Idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)是一種常見的獲得性自身免疫性疾病。目前關于ITP發(fā)病機制的研究很多,包括自身抗體介導的血小板減少及巨核細胞的異常,細胞介導的細胞毒作用,B淋巴細胞激活因子(BAFF)過度表達,協(xié)同刺激分子的作用等,也有研究表明氧化應激與ITP的發(fā)病相關,隨著分子生物學、免疫學、細胞遺傳學等的發(fā)展,在基因?qū)用嫔涎芯縄TP的發(fā)病機制已然具有重要的意義。

2、r>　　 在自身免疫性疾病中,活性氧和活性氮作用產(chǎn)生的抗原決定簇可能會導致抗原表位的播散。氧化應激產(chǎn)生的自由基超出機體清除能力時會對體內(nèi)的蛋白、脂質(zhì)、DNA等進行修飾,從而導致了自身抗體的產(chǎn)生,或者直接對機體組織細胞產(chǎn)生損害,而導致了疾病的發(fā)生。
　　 在表皮細胞,氧化應激相關基因(Vanin-1基因)已被證實是一種氧化應激感受器,它能調(diào)整內(nèi)源性谷胱甘肽的水平,影響氧化還原狀態(tài),從而導致疾病的發(fā)生。已有實驗研究表明,兒童慢性I

3、TP患者體內(nèi)Vanin-1基因表達增高,同時血漿中還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)降低,從而推測Vanin-1基因的表達增高在區(qū)分兒童急慢性ITP的發(fā)病中起到一定作用。本實驗通過檢測Vanin-1基因在成人ITP中的表達情況及測定ITP患者血漿中還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG),來探討Vanin-1的表達與ITP發(fā)病的關系。
　　 方法:
　　 1、本實驗收集了2012.4

4、-2013.1部分在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院血液內(nèi)科住院的ITP病人的血液標本,將其分為初治組54例、復發(fā)組19例、正常對照組30例,其中初治組按治療前后(治療后患者達完全反應)又分為治療前組(54例)和治療后組(49例),復發(fā)組也按治療前后(治療后患者血小板再次升至正常達CR)分為復發(fā)治療前組(19例)和復發(fā)治療后組(19例),在49例治療后達CR的病人中按照治療方法的不同,將其分為聯(lián)合治療組(靜注人免疫球蛋白(0.4g/kg/d)加標量

5、糖皮質(zhì)激素(強的松1mg/kg/d))22例和激素治療組(強的松5mg/kg/d)27例。
　　 2、每例取2.5ml外周血,使用淋巴細胞分離液提取單個核細胞。
　　 3、應用實時免疫熒光定量-聚合酶鏈式反應(Real-timefluorescencequantitativepcr)的技術檢測各組Vanin-1基因的表達水平。
　　 4、并收集以上標本的血漿應用谷胱甘肽試劑盒通過分光光度法進行還原型谷胱甘肽與氧化

6、型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)的測定。
　　 5、試驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理,應用兩個獨立樣本t檢驗或兩個獨立樣本秩和檢驗來進行兩兩比較或做參數(shù)檢驗,將α=0.05作為顯著性檢驗水準。
　　 結(jié)果:
　　 1、Vanin-1基因在初治組、復發(fā)組及正常對照組的相對表達情況
　　 在54例初治組ITP患者中,Vanin-1基因的相對表達水平為4.864±1.471,正常對照組Vanin

7、-1基因的相對表達水平為1.016±0.170,與正常對照組相比初治組Vanin-1基因表達升高,差別具有統(tǒng)計學意義(P=0.000＜0.05);19例復發(fā)組ITP患者的Vanin-1基因的相對表達水平為4.261±1.021,與正常對照組相比Vanin-1基因表達升高,差別具有統(tǒng)計學意義(P=0.000＜0.05);治初組與復發(fā)組相比差別無統(tǒng)計學意義(P=0.228＞0.05)。
　　 2、GSH/GSSG在初治組、復發(fā)組及正

8、常對照組中的情況
　　 在54例初治組ITP患者中,GSH/GSSG的比值為1.579±0.369,正常對照組GSH/GSSG的比值為9.989±1.065,兩者相比差別具有統(tǒng)計學意義(P=0.000＜0.05);19例復發(fā)組ITP患者的GSH/GSSG的比值為1.723±0.565,與正常對照組相比差別有統(tǒng)計學意義(P=0.000＜0.05);初治組與復發(fā)組相比差別無統(tǒng)計學意義(P=0.446＞0.05)。
　　 3、

9、Vanin-1基因在初治組、復發(fā)組治療前及治療達CR后與正常對照組的表達變化情況
　　 在54例初治ITP患者中,治療前Vanin-1基因的相對表達水平為4.864±1.471,49例治療達CR后Vanin-1基因的相對表達水平為1.154±0.219,治療前后相比差別有統(tǒng)計學意義(P=0.000＜0.05),治療后與正常對照組相比差別無統(tǒng)計學意義(P=0.132＞0.05);在19例復發(fā)ITP患者中,治療前Vanin-1基因的

10、相對表達水平為4.261±1.021,19例治療達CR后Vanin-1基因的相對表達水平為1.243±0.475,治療前后相比差別有統(tǒng)計學意義(P=0.000＜0.05),治療后與正常對照組相比差別無統(tǒng)計學意義(P=0.147＞0.05)。
　　 4、GSH/GSSG在初治組、復發(fā)組治療前及治療達CR后與正常對照組的變化情況
　　 在54例初治ITP患者中GSH/GSSG的比值為1.579±0.369,49例治療達CR后

11、GSH/GSSG的比值為9.754±1.219,治療前與治療后相比是降低的,差別具有統(tǒng)計學意義(P=0.000＜0.05),治療后與正常對照組相比差別無統(tǒng)計學意義(P=0.246＞0.05);在19例復發(fā)ITP患者中GSH/GSSG的比值為1.723±0.565,治療達CR后GSH/GSSG的比值為10.143±1.435,治療前與治療后相比是降低的,差別有統(tǒng)計學意義(P=0.000＜0.05),治療后與正常對照組相比差別無統(tǒng)計學意義(

12、P=0.213＞0.05)。
　　 5、不同方法治療后Vanin-1基因的相對表達水平的差異
　　 在初治治療達CR后的49例患者中,我們按照不同的治療方法將其分為聯(lián)合治療組(靜注人免疫球蛋白(0.4g/kg/d)加標量糖皮質(zhì)激素(強的松1mg/kg/d))22例和激素治療組(強的松5mg/kg/d)27例,結(jié)果顯示聯(lián)合治療組Vanin-1基因的相對表達水平為1.145±0.195,激素治療組Vanin-1基因的相對表達

13、水平為1.257±0.397,應用不同方法治療后患者Vanin-1基因的表達水平差別無統(tǒng)計學意義(P=0.291＞0.05)。
　　 6、初治ITP患者按性別、年齡分別分組,Vanin-1在各組中的表達情況
　　 初治ITP患者中女性38例,Vanin-1基因的相對表達水平為4.753±1.286,男性16例Vanin-1基因的相對表達水平為4.834±1.249,兩組相比Vanin-1基因相對表達水平無統(tǒng)計學意義(P=

14、0.232＞0.05),年齡≥60歲者14例,Vanin-1基因的相對表達水平為4.792±1.065,年齡＜60歲者40例,Vanin-1基因的相對表達水平為4.861±1.219,兩者比較Vanin-1基因相對表達水平無統(tǒng)計學意義(P=0.142＞0.05)。
　　 7、初治ITP患者血小板計數(shù)與Vanin-1的表達情況
　　 對初治ITP患者外周血血小板計數(shù)與Vanin-1基因的表達水平進行相關性分析,結(jié)果顯示兩者

15、之間無相關性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、初治組及復發(fā)組ITP患者的Vanin-1基因的表達水平均高于正常對照組,并且在治療有效后Vanin-1基因的表達水平又降低。提示Vanin-1基因可能參與了ITP的發(fā)病過程,為探討ITP的發(fā)病機制提供了理論依據(jù)。
　　 2、初治組及復發(fā)組ITP患者血漿中GSH/GSSG比值明顯低于正常對照組,而在治療有效后比值又升高,提示在ITP患者體內(nèi)存在氧化應激狀態(tài),且