MicroRNA-1和microRNA-2抑制肺癌細胞侵襲和粘附的生物學作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、北京協(xié)和醫(yī)學院博士學位論文MicrNA1和micrNA2抑制肺癌細胞侵襲和粘附的生物學作用研究姓名：劉文揚申請學位級別：博士專業(yè)：臨床醫(yī)學指導教師：宋詠梅王綠化20090601AbstractBackgroundandobjectiveMicroRNAs(miRNAs)aresmallnoncodingRNAgeneproductsapproximately1922nucleotidesinglestrandeclRNAsthatale

2、foundindiverseorganismsregulatinggenesbyeitherinducingmRNAdegradationorinhibitingtranslationwhichhencehavebeenimplicatediuseveralcellularprocessesincludingproliferationdifferentiationapoptosisanddevelopmentTodate，botllin

3、vivoandinvitrostudiesoflungcancerdemonstrateadysregulationofmiRNAexpressionandsuggestitsimportanceinthepathogenesisoflungcancerRecentlyinsmallcelllungcancer(SCLC)patients，wehaveidentifiedthatpatients、jlrinlhighexpression

4、levelofmiR1andmiR2havebetteroverfllsurvivalsandprogressivefreesurvivalscomparedtothelow—expresionlevelpatients，andthis2miRNAsignatureisanindependentpredictorofprognosisforSCLCpatientsThisworkwasaimedtoinvestigatetheeffec

5、tofoverexpressedmiR1andmiR2onthephenotypeoflungcancercelllinesinvitroMethodsSCLCcelllineNCIH446andNSCLCeelllineNCIH1299weretransienttransfectedwithchemicallysynthesizedmaturemiR1andmiR2mimicoligonucleotidesbylipofeeatami

6、ne2000At48haftertransfection，wecarriedoutthevalidationofexpressionlevelforeachmiRNAincelllinesbyrealtimeRT—PCRAt24haftertransfectiontheproliferationassayWaScarriedoutbymanualcellcounting；theprecoatedmatrigeltransweNmodel

7、wasusedfortheinvasionassay；thecellmatrixadhesionassayWasusedtocomparetheadhesiveabilitybetweeneachcelllineandcorrespondingcontrol、析tllprecoatedfibernectin96wellplate；flowcytometryWasusedtoanalyzethedistributionofcelIcycl

8、e麗mPIstainingAt24haftertamsfection，thesecellsweretreated嘶mcisplatinfor24handthenfloweytometrywitllPIstainingWasemployedtoanalyzecellapoptosisResultsHereweshowthatat48haftertransfectiontheexpressionlevelofmiR一1andmiR2inNC

9、IH446andNCIH1299celllineswereallsignificantlyupregulatedIninvitroinvasionassaythepercentageofinvadedcellnumberfromNCIH446andNCI—H1299cellswitlltransientoverexpressedmiR1miR2ormiR1／miR2relativetotheinvadednumberfromcorres

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