神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠延髓腹后內(nèi)側(cè)核NF-κB及下游炎性因子表達的研究.pdf

1、研究背景：
　　 椎間盤源性疼痛是慢性腰背痛的一個主要原因，慢性腰背痛是由于椎間盤內(nèi)部結(jié)構(gòu)髓核的紊亂和纖維環(huán)出現(xiàn)裂隙，髓核漏出到外層纖維環(huán)而導致的。而導致疼痛的炎性機制越來越受到人們的重視。在炎癥機制里參與的各種細胞因子在疼痛的發(fā)生、發(fā)展中起著怎樣的作用，應如何利用這些細胞因子來治療疼痛，引起了廣泛的研究。
　　 目前已知核轉(zhuǎn)錄因子-kappa B(NF-кB)信號轉(zhuǎn)導通路參與調(diào)控神經(jīng)病理性疼痛中多種炎癥介質(zhì)的表達，加劇

2、炎癥反應，引起疼痛。多種炎癥介質(zhì)受NF-кB信號轉(zhuǎn)導通路的調(diào)控，使炎性因子的表達顯著增加，如白細胞介素-6(IL-6)、一氧化氮(NO)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPS)、前列腺素-2(PGE22)、磷脂酶-2(PLA-2)等。有研究報導了在背根神經(jīng)節(jié)和脊髓背角處的NF-кB信號傳導通路在疼痛發(fā)生時被激活的情況。
　　 但這些研究均采用結(jié)扎坐骨神經(jīng)或腰神經(jīng)根的方法來構(gòu)建實驗動物模型，與椎間盤源性疼痛產(chǎn)生

3、的病理生理機制不盡相同。我們模擬臨床椎間盤源性疼痛的病理形式建立了一個新的椎間盤疼痛動物模型，并研究在該模型下研究延髓腹內(nèi)側(cè)核神經(jīng)元中NF-кB及下游炎癥介質(zhì)的變化情況。盡管Kawakami等率先采用了該模型研究自體髓核導致的椎間盤性疼痛，但目前僅局限于腰神經(jīng)根和背根神經(jīng)節(jié)水平。
　　 目前已知延髓頭端腹內(nèi)側(cè)核群(RVM)，它接受前額葉皮層、下丘腦、中央導水管周圍灰質(zhì)(PAG)和臂旁核等結(jié)構(gòu)的傳入，其傳出纖維主要經(jīng)過脊髓背外側(cè)束

4、和腹外側(cè)束下行到達脊髓背角，參與疼痛通路的傳遞。在慢性疼痛狀態(tài)下，RVM被認為參與調(diào)節(jié)下行激動系統(tǒng)。NF-кB認為是調(diào)節(jié)炎性因子表達的重要轉(zhuǎn)錄信號之一，例如在慢性炎性疼痛中刻意調(diào)節(jié)白介素6(IL-6)的表達。但對于該模型下延髓腹內(nèi)側(cè)核群的神經(jīng)元是否參與炎癥機制還缺乏深入的研究。
　　 目的：
　　 本實驗將著眼于研究椎間盤退變引起的神經(jīng)病理性疼痛的誘因，即椎間盤退變，髓核誘發(fā)機體免疫反應；產(chǎn)生疼痛時內(nèi)部的炎癥介質(zhì)表達情況

5、的變化；以及疼痛感覺傳導通路的中繼核團參與調(diào)控的情況加以研究。本實驗研究探討延髓頭端腹內(nèi)側(cè)核團及脊髓背角中NF-кB及下游炎性因子IL-6參與疼痛的調(diào)控機制，以期尋找為神經(jīng)病理性疼痛的預防和治療提供新的方法和途徑。
　　 方法：
　　 1.神經(jīng)病理性疼痛模型的建立與分組：56只成年雄性SD大鼠隨機分為兩組：手術(shù)組和假手術(shù)組，手術(shù)組取自體尾椎纖維環(huán)碎塊置于右側(cè)第4、5腰神經(jīng)根前內(nèi)側(cè)、髓核涂于表面，假手術(shù)組僅暴露神經(jīng)根，不做

6、處理。術(shù)前及術(shù)后1、4、7、14、28天分別測定雙側(cè)后肢足底的機械痛閾和熱痛閾。
　　 2.免疫組織化學(IHC)測定：心臟灌注后，取材，切片，備用。IHC測定各組組織中NF-кB和炎性因子的表達差異，應用TJTY-400TC彩色細胞圖像分析儀對各組切片隨機抽取的20個不相互重疊的視野進行分析，計算NF-кBp65和IL-6免疫反應陽性細胞數(shù)。
　　 3.Western-blot：測量痛閾完成后，處死大鼠。置于生理鹽水冰

7、塊上取出延髓節(jié)段，剪除周圍組織，保留RVM部分備用。采用UNSCAN-IT生物電泳圖像分析系統(tǒng)對Western印跡顯示的免疫反應陽性條帶進行吸光度測定，以NF-kappa B和β-actin條帶的吸光度的比值代表NF-kappa B表達的相對水平。
　　 4.統(tǒng)計學處理：用SPSS13.0分析軟件進行數(shù)據(jù)處理，當P<0.05時認為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組痛閾的變化：術(shù)前各組大鼠機械痛閾和

8、熱痛閾值的比較無統(tǒng)計學意義。術(shù)后第1～3d，兩組大鼠的熱痛和機械痛閾值無明顯差異。手術(shù)組：患側(cè)在第4天閾值降低(P<.05)，第7天達到峰值與Sham組比較(P<.05)，7d后開始逐漸恢復，持續(xù)到第28天(P<.05)。手術(shù)組內(nèi)同一大鼠左右側(cè)比較在術(shù)后4d、7d、14d，有顯著性差異(P<.05)。假手術(shù)組內(nèi)左右兩側(cè)術(shù)前術(shù)后痛閾的比較均無統(tǒng)計學差異。
　　 2.Western-blot測定結(jié)果：手術(shù)組，NF-kappa B的表

9、達在4d開始增高，術(shù)后第7天達到最高值，然后開始降低，持續(xù)到28天。假手術(shù)組各時間點則沒有明顯變化.兩組在術(shù)后各時間點的表達存在顯著性差異(P<.05)。鞘內(nèi)給藥后，PDTC+手術(shù)組NF-kappa B表達量顯著降低，較未給藥組存在顯著性差異(P<.05)。
　　 3.免疫組化測定結(jié)果：假手術(shù)組陽性細胞較少，而手術(shù)組陽性細胞則明顯增多(P<.05)，炎癥因子IL-6也出現(xiàn)相同表達趨勢。
　　 結(jié)論：
　　 1.本