神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角NF-κB及其下游相關(guān)因子表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察大鼠脊髓背角中NF-κB及其下游相關(guān)因子TNF-α、iNOS在坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(CCI)疼痛模型中表達(dá)的變化規(guī)律。
　　 方法:健康雄性SD大鼠104只,體重220～280g,隨機(jī)分為手術(shù)組(CCI組)和假手術(shù)組(Sham組)(n=52),CCI組采用結(jié)扎坐骨神經(jīng)干的方法建立坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(CCI)模型,而Sham組僅暴露坐骨神經(jīng)干,不予結(jié)扎。于CCI前1d、CCI后1、4、7、14、21d各時(shí)間點(diǎn)測(cè)定機(jī)

2、械痛閾及熱痛閾后立即處死大鼠,取腰髓,采用Western blot檢測(cè)NF-κB的表達(dá)水平;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR.和免疫熒光雙標(biāo)的方法分別測(cè)定NF-κB、TNF-α和iNOS的mRNA含量和蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.行為學(xué)變化:CCI組大鼠術(shù)側(cè)熱痛閾及機(jī)械痛閾在術(shù)后第1d開(kāi)始出現(xiàn)下降(P<0.05),分別于術(shù)后4d和7d痛閾下降達(dá)到最低(P<0.01),以后逐漸恢復(fù),但至21d仍處于較低水平(P<0.05)。

3、
　　 2.Western blot檢測(cè)NF-κB的表達(dá)水平:CCI組大鼠術(shù)側(cè)脊髓中NF-κB表達(dá)于術(shù)后4～7d顯著增高,而CCI組健側(cè)及Sham組術(shù)側(cè)脊髓未有明顯變化。
　　 3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR分別測(cè)定NF-κB、TNF-α和iNOS的mRNA表達(dá):NF-κB和TNF-αmRNA水平于CCI后4 d開(kāi)始增加(P<0.05),7 d達(dá)到高峰(P<0.01),隨后TNF-α迅速下降,而NF-κB于CCI后21天仍維持于

4、較高水平(P<0.05)。CCI組大鼠術(shù)側(cè)脊髓中NF-κB水平和TNF-α的表達(dá)增加,明顯高于對(duì)側(cè)和Sham組,而iNOS于各組脊髓中的表達(dá)未見(jiàn)明顯變化。
　　 4.免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)NF-κB、TNF-α和iNOS的蛋白表達(dá):術(shù)后第7天的免疫熒光雙標(biāo)顯示NF-κB和TNF-α在術(shù)側(cè)脊髓背角存在共定位表達(dá),與sham組相比,CCI組術(shù)側(cè)脊髓背角可見(jiàn)大量的雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞,而在CCI組和sham組中均未發(fā)現(xiàn)有明顯的iNOS陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。