NF-κB、IL、TNF-α與VEGF在急性肺損傷中表達(dá)的研究.pdf

1、目的：急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是以肺血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺泡上皮細(xì)胞廣泛損傷為病理特征的一種失控的炎癥反應(yīng)，是急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)的早期階段，臨床上表現(xiàn)為肺部彌漫性滲出和難以糾正的低氧血癥。ALI是全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemicinflammatory response syndrome，SIRS)所致多器官功能障礙綜合征(

2、multiple organ dysfunction syndrome，MODS)的肺部表現(xiàn)，體內(nèi)失控性釋放的大量炎癥介質(zhì)與ALI的發(fā)病密切相關(guān)。近年研究表明，核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，多種炎癥介質(zhì)基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子中存在一個(gè)或多個(gè)κB序列，如白細(xì)胞介素(interleukin，IL)家族、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)?；罨腘F

3、-κB可單獨(dú)或與其他轉(zhuǎn)錄因子協(xié)同參與上述介質(zhì)基因的誘導(dǎo)表達(dá)。有研究表明，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)能夠促進(jìn)肺泡上皮的增殖，加速受損上皮恢復(fù)。并且VEGF能夠發(fā)揮血管擴(kuò)張作用，當(dāng)ARDS發(fā)生時(shí)，肺泡毛細(xì)血管膜受損后，VEGF又會(huì)促進(jìn)肺水腫的發(fā)生。但是，目前對(duì)于VEGF在ALI究竟是一個(gè)有益因素還是有害因素尚存在爭(zhēng)議。 方法：1、經(jīng)大鼠尾靜脈注射LPS造模。按LP

4、S不同劑量2、4、6、8 mg、kg分組，并設(shè)生理鹽水對(duì)照組，3、6小時(shí)兩個(gè)時(shí)相點(diǎn)腹腔注射異戊巴比妥，開(kāi)胸、左心取血處死動(dòng)物，分離血清。結(jié)扎并切取正常對(duì)照組和LPS組大鼠右肺最小葉。提取RNA和細(xì)胞總蛋白。采用RT-PCR檢測(cè)NF-κB、IL-4、IL-6、IL-10、IL-13、VEGF與TNF-α mRNA表達(dá)水平，western印記檢測(cè)VEGF與TNF-α蛋白表達(dá)水平。 2、用LPS 4 mg/kg造模，3天和6d后各處死一組大鼠

5、，取肺，提取mRNA和蛋白檢測(cè)VEGF表達(dá)。 結(jié)果：1.LPS造模效果：LPS致傷以后，大鼠呼吸頻率增快或呼吸困難；隨著LPS劑量增大，呼吸困難程度加重。當(dāng)LPS為6 mg/kg時(shí)，出現(xiàn)呼吸窘迫，劑量達(dá)到8mg/kg時(shí)，常伴有粉紅色泡沫樣肺水腫液由鼻腔溢出，死亡率明顯升高；小劑量LPS(2mg/kg)對(duì)大鼠的PaO2影響不大；大劑量LPS可以誘導(dǎo)大鼠PaO2顯著降低。 2.NF-κB、IL-4、IL-6、IL-10、IL

6、-13、VEGF與TNF-α的表達(dá)：NF-κB的表達(dá)水平在正常對(duì)照組中的表達(dá)水平最低，隨著LPS劑量的增加，NF-κB的表達(dá)水平顯著增加。IL-4、IL-6、IL-13的表達(dá)水平隨著L-PS劑量的增加而顯著升高。IL-10的表達(dá)：在正常對(duì)照組中的表達(dá)水平最高，在模型組中，隨著給藥劑量的增加，表達(dá)水平顯著降低；VEGF的表達(dá)水平在正常對(duì)照組中最高，隨著LPS劑量的增加，VEGF的表達(dá)水平顯著降低;TNF-α在正常對(duì)照組的表達(dá)中的表達(dá)水平最

7、低，隨著LPS劑量的增加，其表達(dá)水平顯著增高。 3.LPS誘導(dǎo)急性肺損傷后不同時(shí)間VEGF表達(dá)變化： 在損傷早期，可見(jiàn)VEGF的表達(dá)水平明顯下降，在第3天，可見(jiàn)模型動(dòng)物有較為嚴(yán)重的呼吸困難，VEGF的表達(dá)水平繼續(xù)下降，到第6天，模型組大鼠一般情況明顯好轉(zhuǎn)，VEGF的表達(dá)水平明顯升高，甚至高于正常對(duì)照組。結(jié)論： 1. 采用LPS進(jìn)行急性肺損傷造模效果好，成?？?，重復(fù)性強(qiáng)。 2. NF-κB的表達(dá)水平隨LPS