大鼠同種MSC門靜脈輸注對肝大部分切除肝衰模型作用的研究.pdf

1、[目的]
　　 肝癌是我國常見的惡性腫瘤，現階段，肝癌的治療仍然首選手術治療。但肝癌惡性程度高，預后差，且肝癌早期缺乏典型臨床癥狀，導致很多肝癌患者在就診時候往往已經喪失手術治療機會。手術治療肝癌，腫瘤切除后余肝大小及肝硬化程度往往是大肝癌能否切除的關鍵。術后發(fā)生肝功能衰竭是最危險的并發(fā)癥之一。原位肝移植(orthotopic liver transplantation，OTL)是目前治療終末期肝病和代謝性肝病最有效的方法，但目

2、前異體肝移植存在供肝嚴重不足，手術及維持費用昂貴，手術風險大，以及移植由于免疫排斥的發(fā)生而導致供肝功能喪失等缺點，OTL在臨床廣泛開展仍有一定的困難。
　　 干細胞移植技術的出現，帶來新的希望。
　　 骨髓間充質干細胞(bone marrow stem cell，BMSC)具有多能分化的特點，在體外不同的誘導條件下可分化為骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、肌腱、肌肉細胞、肝細胞、神經細胞等多種細胞。由于BMSC有取材方便、易于

3、體外培養(yǎng)擴增、植入體內不易引起免疫排異反應、不存在倫理學爭議等眾多優(yōu)點，而且近年的研究發(fā)現，MSCs對肝臟疾病治療不僅在于為替代肝細胞移植、在早期即能修復肝臟損傷，而且還能夠降低宿主抗移植物反應。MSCs作為種子細胞治療終末期肝病的應用將越來越大。
　　 為了進一步改善肝大部分切除術后肝功能衰竭的情況，降低圍手術期死亡率，本研究將對骨髓間充質細胞(MSC)肝內移植對大鼠肝80％切除肝衰竭模型術后肝功能、生存率的影響作初步探討。<

4、br>　　 [方法]
　　 1.肝大部分切除邊緣肝衰竭大鼠模型的建立：手術切除大鼠80％肝組織(切除肝左葉、右葉、方葉下段，保留方葉上段、尾葉)，觀察大鼠的存活，肝功能生化指標；建立大鼠極限肝切除模型。(n=15)
　　 2.移植MSC制備：梯度離心+貼壁法分離大鼠原代MSC，傳代純化，流式細胞學鑒定，用脂質體Lipofectamine2000將PE-GFP C3轉染MSC作為體內示蹤工具。
　　 3.MSC肝

5、內移植對肝大部分切除邊緣肝衰竭模型術后生存率、肝功能的影響： A組，即實驗組(n=18)：80％肝葉切除+門脈注射0.5ml含1×106MSC的PBS，B組，即對照組(n=18)：80％肝葉切除+門脈注射0.5mlPBS。觀察術后大鼠的存活率、肝功能生化指標及受體大鼠肝組織內移植細胞情況。
　　 [結果]
　　 1.手術切除大鼠80％肝組織可以建立大鼠極限肝切除模型。7天后存活情況7/15，存活率為46.7％。
　

6、　 2.成功分離大鼠原代MSC，流式細胞學結果CD29+(99.3％)、CD44+(97.1％)CD34+(0.7％)、CD45+(1.4％)。GFP標記MSC成功。
　　 3.MSC肝內移植對肝大部分切除模型術后生存率、肝功能的影響：術后7天內的存活率分別為A組72.2％(13/18)、B組44.4％(8/18)。A組的存活率明顯高于B組(72.2％VS44.4％，P＜0.05；A組大鼠術后肝功能恢復情況明顯優(yōu)于B組(p＜0