不同表面種植體軟組織袖口臨床和組織學(xué)的比較研究.pdf

1、研究背景:
　　 種植材料應(yīng)具有良好的生物相容性、穩(wěn)定的理化性能且便于加工。目前應(yīng)用的種植體材料多數(shù)是鈦種植體，不少學(xué)者通過(guò)離子噴涂及鈦表面酸蝕技術(shù)或其理化方法（如激光蝕刻）改變種植體表面的形態(tài)特征，表面成分及增大接觸面積來(lái)提高種植體骨接觸率，以實(shí)現(xiàn)良好的初期穩(wěn)定性。然而，種植義齒要獲得長(zhǎng)期穩(wěn)定的骨整合及良好的美學(xué)效果，軟組織整合也是其重要保障。目前越來(lái)越多的學(xué)者把種植體的研究熱點(diǎn)轉(zhuǎn)移到軟組織整合及軟組織美學(xué)效果上。
　　

2、 通常認(rèn)為種植體在植入后能獲得良好的初期穩(wěn)定性的前提下，愈合3個(gè)月后，新骨的形成礦化較少，可達(dá)到骨形成和改建的穩(wěn)定性。新骨的礦化沉積率可以通過(guò)雙色熒光標(biāo)記法進(jìn)行測(cè)定。
　　 種植體周圍牙齦及粘膜軟組織可直接附著在種植體或基臺(tái)的表面，形成種植體軟組織袖口。多數(shù)種植體由光滑頸部及粗糙體部組成。因此種植體軟組織袖口直接與光滑表面接觸。臨床常常由于多種原因?qū)е路N植體周圍骨吸收，軟組織退縮致使軟組織袖口直接附著在粗糙表面，如種植體周圍炎

3、切除性治療后軟組織退縮、臨床種植體植入深度過(guò)淺或種植體過(guò)度負(fù)荷造成骨組織吸收，導(dǎo)致軟組織退縮，使種植體軟組織直接附著在粗糙的表面。臨床發(fā)現(xiàn)早期的Br(a)nemark種植體在軟組織袖口退縮后直接附著在機(jī)械表面，長(zhǎng)期使用后，仍然能維持穩(wěn)定。種植體軟組織袖口如果退縮至粗糙的種植體表面，能否像光滑表面一樣獲得長(zhǎng)期的穩(wěn)定性，是本實(shí)驗(yàn)研究的目的。
　　 健康的種植體軟組織袖口有利于形成良好的生物學(xué)封閉，抵御外來(lái)細(xì)菌及微生物的侵襲。不同文獻(xiàn)

4、對(duì)軟組織袖口的研究尚未形成統(tǒng)一定論。有學(xué)者認(rèn)為粗糙的種植表面有利于上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)及延伸，而光滑的種植體表面則細(xì)胞的形態(tài)較平坦，平鋪生長(zhǎng)方向。緊密的上皮結(jié)合有利于生物學(xué)封閉的維持。粗糙的表面也有利于增加種植體骨接觸面積，同光滑表面相比，能有效的增加種植體的穩(wěn)定性。
　　 本課題旨在通過(guò)對(duì)不同表面種植體在愈合3個(gè)月后，臨床探診指標(biāo)、新骨礦化沉積率以及組織學(xué)的觀察，比較不同表面種植體軟組織袖口的組織學(xué)特性。
　　 目的

5、　　 1.4只Beagle犬，拔除下頜雙側(cè)各4顆前磨牙延期植入不同表面處理方式的種植體，建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。通過(guò)3個(gè)月的愈合階段，比較種植體植入后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月時(shí)的臨床探診指標(biāo)。
　　 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在處死前不同時(shí)間進(jìn)行雙色熒光標(biāo)記法，測(cè)量熒光條帶之間的距離，比較不同表面處理方式在種植體植入后3個(gè)月后新骨礦化沉積的速率。
　　 3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死后，制取下頜骨帶種植體標(biāo)本，進(jìn)行Micro-CT掃描，分析測(cè)量種植體螺紋

6、間成骨效應(yīng)，比較不同種植體表面處理方式在愈合3個(gè)月后骨參數(shù)的差異性。
　　 4.制取標(biāo)本后，通過(guò)塑料包埋技術(shù)，制作帶種植體骨磨片，顯微鏡下觀察不同表面處理方式種植體軟組織袖口的組織學(xué)特性。
　　 方法
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
　　 選擇健康成年雄性Beagle犬4只，犬齡12～14個(gè)月，體重14.7～18.0kg。Beagle犬的齒式為2(I3/3，C1/1，Pm4/4，M2/3)，全口共42顆牙。所選實(shí)驗(yàn)動(dòng)

7、物生化指標(biāo)正常，精神正常，無(wú)急性炎癥，無(wú)傳染性疾病，無(wú)慢性牙周病及齲病，咬合關(guān)系正常。飼養(yǎng)于中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，獨(dú)立分籠圈養(yǎng)，定時(shí)定量飲食。
　　 2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
　　 種植體設(shè)計(jì)與分組:由韓國(guó)奧齒泰種植公司惠贈(zèng)，按照SSⅡ種植系統(tǒng)直徑4.1mm，長(zhǎng)度10mm規(guī)格制作，要求制作表面不同處理方式及粗糙程度的種植體，體部和頸部均為同一種表面處理方式。根據(jù)不同表面處理方式分為4組，分別為MM組，RBM組，SA組和Bio-SA組

8、。4只Beagle犬拔牙后愈合3個(gè)月，測(cè)量缺牙區(qū)間的距離。設(shè)計(jì)每只Beagle犬每側(cè)植入5顆種植體，共40顆。每組表面處理種植體各10顆，采用隨機(jī)數(shù)字表法，編號(hào)植入。
　　 3.動(dòng)物模型的建立
　　 4只Beagle犬適應(yīng)一周后，即準(zhǔn)備進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。術(shù)前12h禁飲食，術(shù)前2h肌肉注射青霉素40萬(wàn)u/d，速眠新和戊巴比妥鈉復(fù)合麻醉下，微創(chuàng)拔除下頜雙側(cè)各4顆前磨牙。術(shù)后3d肌肉注射青霉素80萬(wàn)u/d，拍攝CT，定期觀察拔牙創(chuàng)愈合

9、情況。待拔牙創(chuàng)愈合3個(gè)月后，自牙槽嵴頂切開(kāi)，翻開(kāi)粘膜瓣，下頜雙側(cè)各植入5顆種植體。上愈合帽，術(shù)后3d肌肉注射青霉素80萬(wàn)u/d。種植體植入手術(shù)由一經(jīng)驗(yàn)豐富的種植專家完成。愈合3個(gè)月后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
　　 4.臨床指標(biāo)測(cè)量
　　 種植體植入后1w，觀察種植術(shù)區(qū)愈合情況。種植體周圍無(wú)感染，無(wú)松動(dòng)脫落。分別于術(shù)后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月進(jìn)行臨床探診檢查。檢查種植體松動(dòng)度、叩診聲音、測(cè)量菌斑指數(shù)(PI)、牙齦指數(shù)(GI)、齦溝出血

10、指數(shù)(SBI)、探診出血(BOP)及牙周探診深度(PD)。
　　 5.Micro-CT指標(biāo)測(cè)量
　　 制取下頜骨標(biāo)本后，先于10％福爾馬林液固定4d，然后轉(zhuǎn)移在70％酒精中浸泡。掃描時(shí)先用塑料保鮮膜包裹整個(gè)標(biāo)本，避免標(biāo)本干燥，影響組織學(xué)的觀察結(jié)果。掃描完成后繼續(xù)浸泡在70％酒精中。
　　 6.熒光標(biāo)記測(cè)量
　　 4只Beagle犬在處死前13、14d按30mg/kg頸部皮下注射10mg/ml四環(huán)素，處死前

11、3d、4d按10mg/kg頸部皮下注射10mg/ml鈣黃綠素，固定標(biāo)本，進(jìn)行甲基丙烯酸甲酯包埋，使用Leica1600硬組織切片機(jī)切片，制作手工磨片，熒光顯微鏡下觀察兩種顏色條帶，并多次測(cè)量取條帶間的平均距離進(jìn)行比較。
　　 7.組織學(xué)觀察
　　 制取標(biāo)本后，10％福爾馬林液固定，梯度酒精逐級(jí)脫水，包埋液浸泡，升溫聚合，完成最終包埋，Leica1600切片厚，手工磨片，蕩洗，亞甲基藍(lán)-酸性品紅染色，封片，移至光學(xué)顯微鏡下

12、觀察。
　　 8.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。術(shù)后1-3個(gè)月4組PD的變化比較采用單個(gè)重復(fù)測(cè)量因素的方差分析;四種表面種植體骨分析指標(biāo)BVF、Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp比較、熒光于螺紋內(nèi)及遠(yuǎn)離螺紋區(qū)域時(shí)四組間測(cè)量值的比較以及組織觀察長(zhǎng)度比較采用單向方差分析（One-WayANOVA）;術(shù)后1-3個(gè)月，4組探診比較采用多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)(KIndependentSamplesTest

13、)中的多組等級(jí)/頻數(shù)表資料的比較進(jìn)行統(tǒng)計(jì);四組種植體熒光測(cè)量于螺紋間和遠(yuǎn)離螺紋的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)(Paired-SamplesTTest)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。
　　 結(jié)果
　　 1.大體觀察:
　　 各組動(dòng)物均無(wú)死亡，術(shù)后飲食、活動(dòng)規(guī)律正常，創(chuàng)口愈合良好，粘膜無(wú)紅腫、滲出，種植體及愈合帽無(wú)松動(dòng)、脫落，存留率100％。4只Beagle犬拔牙后延期種植的動(dòng)物模型成功建立。
　　 2.探診指標(biāo)測(cè)量

14、>　　 經(jīng)過(guò)術(shù)后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月臨床探診指標(biāo)觀察，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較。術(shù)后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月時(shí)4組PD的變化比較無(wú)顯著性差異;術(shù)后1個(gè)月時(shí)4組探診比較BOP、GI之間無(wú)顯著性差異，認(rèn)為4組探診出血及牙齦指數(shù)相當(dāng)。PI和SBI均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為MM菌斑沉積最少，其次為Bio-SA、SA、RBM。SBI指數(shù)MM組最低，其次為Bio-SA、RBM組和SA;術(shù)后2個(gè)月4組PI指數(shù)和GI指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BOP和SBI四組比較有意義，認(rèn)

15、為SBI指數(shù)和BOP均為MM組最低，其次為Bio-SA、SA和RBM組;術(shù)后3個(gè)月探診4組各項(xiàng)指標(biāo)比較均無(wú)顯著性差異，認(rèn)為3個(gè)月后，4種表面處理的種植體軟組織袖口健康指數(shù)相當(dāng)。
　　 3.Micro-CT測(cè)量結(jié)果
　　 制取好的標(biāo)本，通過(guò)Micro-CT掃描進(jìn)行骨分析，通過(guò)測(cè)量BVF、Tb.N、Tb.Sp、Tb.Th來(lái)進(jìn)行骨分析，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較結(jié)果顯示RBM組與SA組之間無(wú)顯著性差異，余兩兩比較均存在顯著差異。其中

16、Bio-SA組相對(duì)骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)量及骨小梁厚度最高，而MM組最低，骨小梁分離度MM組最高，Bio-SA反之。
　　 4.雙色熒光標(biāo)記法測(cè)量結(jié)果
　　 處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，通過(guò)熒光顯微鏡觀察到雙色熒光標(biāo)記帶?？拷N植體側(cè)為橙黃色熒光條帶，遠(yuǎn)離種植體側(cè)為亮綠色熒光條帶。測(cè)量?jī)蓷l條帶之間的距離/兩次給藥間隔時(shí)間，即可計(jì)算出新骨礦化沉積的速率。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，螺紋內(nèi)熒光四組間測(cè)量值的比較各組之間無(wú)顯著性差異;比較四組種植體螺紋

17、間和遠(yuǎn)離螺紋區(qū)域，結(jié)果顯示MM組和Bio-SA組熒光測(cè)量在螺紋間和遠(yuǎn)離螺紋之間存在顯著性差異，而RBM組和SA組的熒光測(cè)量在螺紋間和遠(yuǎn)離螺紋之間無(wú)顯著性差異。
　　 5.組織學(xué)比較
　　 通過(guò)塑料包埋制作骨磨片標(biāo)本，經(jīng)亞甲基藍(lán)-酸性品紅染色后，可以成功的觀察種植體周圍軟硬組織的變化情況。其中軟組織被染成藍(lán)色、骨組織被染色成紅色。通過(guò)比較種植體軟組織袖口的組織學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)不同軟組織袖口在上皮細(xì)胞的排列、附著及膠原纖維的生長(zhǎng)

18、方向比較上，未見(jiàn)顯著性差異，均沿著種植體頸部向根部延伸生長(zhǎng)。但是通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較種植體齦緣到種植體間的水平距離，光滑頸部及粗糙頸部之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。顯示粗糙的種植體表面結(jié)合上皮貼合的更加緊密，更有利于生物學(xué)封閉的形成。
　　 結(jié)論
　　 1.Beagle犬的牙槽骨形態(tài)、骨質(zhì)密度與人接近，且容易飼養(yǎng)、生命力頑強(qiáng)，性格溫順，價(jià)格經(jīng)濟(jì)，是口腔動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的首選。通過(guò)Beagle犬拔牙后采用延期植入種植體的方法，能成功的建立種植體骨

19、整合的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
　　 2.4只Beagle犬種植術(shù)后精神狀況良好，探診結(jié)果認(rèn)為4種不同表面的種植體的PD沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PI、GI、SBI指數(shù)有些許差異，但均在正常范圍之內(nèi)，認(rèn)為4種不同表面的種植體均能維持健康的軟組織狀態(tài)，3個(gè)月后均可獲得軟組織的穩(wěn)定性。
　　 3.Micro-CT測(cè)量分析3個(gè)月后新骨的生成情況，認(rèn)為Bio-SA組具有最多的骨小梁數(shù)量及骨體積分?jǐn)?shù)，而MM組骨小梁數(shù)量最少。
　　 4.熒光測(cè)

20、量及分析:比較不同表面處理方式新生骨礦化沉積率，顯示3個(gè)月后，MM組及Bio-SA組種植體螺紋內(nèi)仍然存在新骨生成，而遠(yuǎn)離螺紋區(qū)域新骨生成較少。認(rèn)為MM組和Bio-SA組種植體在3個(gè)月后種植體周圍新骨礦化相對(duì)較多。
　　 5.組織形態(tài)學(xué)觀察:通過(guò)制作帶種植體軟硬組織磨片，比較不同表面處理方式的種植體軟組袖口，認(rèn)為結(jié)合上皮的生長(zhǎng)、結(jié)締組織及膠原纖維的方向沒(méi)有顯著性差異，顯示，粗糙表面的軟組織袖口血管生成較多、纖維含量相對(duì)較少，光滑表