乳酸對(duì)大鼠髓核細(xì)胞的外基質(zhì)合成和促進(jìn)凋亡及自噬水平的影響.pdf

1、目的:
　　椎間盤是無(wú)血管的組織結(jié)構(gòu)，椎間盤內(nèi)存在的無(wú)氧酵解是椎間盤組織的主要能量來(lái)源。因?yàn)闊o(wú)氧酵解作用，椎間盤內(nèi)部存在一定濃度的乳酸，且有研究表明在退變椎間盤組織內(nèi)存在較高濃度乳酸。本實(shí)驗(yàn)探討乳酸能否引起髓核細(xì)胞的凋亡、自噬和以及對(duì)外基質(zhì)成分的影響。
　　方法:
　　取SD大鼠的髓核細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，取第三代鼠髓核細(xì)胞，分為三組:2mM乳酸組，6mM乳酸組，未加底物組。筆者用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性，用透射電鏡及weste

2、rnbloting法檢測(cè)細(xì)胞自噬，用TUNEL法及western bloting法檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平，RT-PCR及免疫組化檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)中一型膠原、二型膠原的變化。
　　結(jié)果:
　　我們課題組發(fā)現(xiàn)6mM乳酸組細(xì)胞活性明顯下降(P＜0.05)。且通過(guò)透射電鏡的檢測(cè)，可以看到6mM乳酸組細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在自噬小體。western bloting結(jié)果顯示6mM乳酸組細(xì)胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率要比2mM乳酸組細(xì)胞的高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

3、意義。電鏡及western blot結(jié)果表明，6mM乳酸可以誘導(dǎo)髓核細(xì)胞引起自噬。而且凋亡水平也同時(shí)升高:TUNEL結(jié)果表明6mM乳酸組細(xì)胞凋亡率為28.33±3.05％，統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在意義(p＜0.05);6 mM乳酸組細(xì)胞的caspase-3，activedcaspase-3表達(dá)升高。研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)6mM乳酸會(huì)引起二型膠原的蛋白表達(dá)和mRNA水平降低，一型膠原的蛋白表達(dá)和mRNA水平升高，統(tǒng)計(jì)有顯著意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論