成纖維生長因子在大鼠后肢發(fā)育早期不同階段表達(dá)變化及意義.pdf

1、背景 成纖維生長因子(fibroblast growth factors，F(xiàn)GFs)是一類具有廣泛生物學(xué)效應(yīng)的生長因子，具有促進(jìn)血管生成、影響胚胎發(fā)育、刺激成纖維細(xì)胞增殖和加速傷口愈合等作用。其中FGF-2(也稱bFGF)表達(dá)范圍最廣，也最為重要。既往的研究發(fā)現(xiàn)FGFs在骨骼、軟骨和血管等組織的發(fā)育過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，而且作用機(jī)制比較復(fù)雜。目前尚未見國內(nèi)有關(guān)FGFs在肢體發(fā)育早期表達(dá)變化的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的文獻(xiàn)報(bào)道。

2、目的 通過在大鼠肢體發(fā)育早期血清學(xué)FGF的表達(dá)以及后肢標(biāo)本中bFGF的表達(dá)情況，明確其在大鼠后肢肢體發(fā)育早期過程中在組織中和時(shí)間上的變化規(guī)律，從而推測其對(duì)于各種組織細(xì)胞可能產(chǎn)生的生物學(xué)作用。 材料與方法 清潔級(jí)SD孕鼠5只，實(shí)驗(yàn)前設(shè)計(jì)5只清潔級(jí)孕鼠的新生鼠為實(shí)驗(yàn)樣本量。在5只清潔級(jí)孕鼠生產(chǎn)前隨意確定為A、B、C、D和E組鼠，A～E組鼠分別于生后1、3、5、10和15天處死，留取血清及雙側(cè)后肢的標(biāo)本，由于A、B組鼠

3、(生后1天、3天)難以留取0.5mL的血清，僅留取C～E組鼠的血清。A～E組鼠分別生產(chǎn)10、6、8、6和6只新生鼠。C～E組新生鼠分別留取8、6和6份血清標(biāo)本、A～E組分別留取20、12、16、12、12個(gè)雙后肢肢體標(biāo)本供實(shí)驗(yàn)所用。對(duì)血清標(biāo)本用EIJSA法測定血清中FGF的濃度，并對(duì)各組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以明確是否隨時(shí)間變化而產(chǎn)生對(duì)后肢差異。對(duì)后肢標(biāo)本進(jìn)行bFGF的免疫組化染色，從而觀察bFGF在后肢標(biāo)本中的表達(dá)情況。通過各組織間比較，觀

4、察bFGF的在不同組織中表達(dá)變化的規(guī)律。 結(jié)果 在C、D、E組中FGF在血清中的平均濃度(用x±s表示)分別為：0.279±0.264、-0.0353±0.067、-0.077±0.090(ng/mL)。通過秩和檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)C、D組間和C、E組間FGF濃度在統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在顯著的差異(P<0.01)，而D、E組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不明顯(P>0.05)。在新生小鼠的后肢標(biāo)本組織學(xué)bFGF免疫組化染色中，可見其表達(dá)的范圍較廣，在軟骨、肌

5、肉、骨膜和血管內(nèi)壁中均有表達(dá)，且隨時(shí)間變化存在一定的變化規(guī)律：1)在血管內(nèi)壁中早期表達(dá)強(qiáng)，隨生后天數(shù)增加而逐漸減弱，在E組(生后15天)，組織中bFGF表達(dá)已不明顯。2)在骨骼肌組織中可見bFGF的表達(dá)，呈現(xiàn)出隨生后天數(shù)增加有逐漸減弱的趨勢。3)在關(guān)節(jié)軟骨中bFGF表達(dá)較強(qiáng)，且在關(guān)節(jié)面軟骨的表達(dá)要強(qiáng)于中心部位的軟骨，這種表達(dá)隨出生后天數(shù)增加也呈現(xiàn)出逐漸減弱的趨勢。4)bFGF在骨骺部增殖層和肥大細(xì)胞層以及骨膜內(nèi)均可見表達(dá)，早期表達(dá)較強(qiáng)，

6、隨時(shí)間變化呈逐漸減弱趨勢，在D組(生后10天)及E組(生后15天)中bFGF‘表達(dá)已不明顯。5)在B組～E組干骺端成骨細(xì)胞內(nèi)可見bFGF的表達(dá)，且這種表達(dá)不同于它在其他組織內(nèi)的表達(dá)，并不隨生后時(shí)間的延長而呈現(xiàn)減弱的趨勢，一直呈現(xiàn)為較高的表達(dá)。 結(jié)論 在大鼠后肢發(fā)育的早期，bFGF在后肢肢體各組織中存在著良好的表達(dá)，提示它在肢體發(fā)育過程中與軟骨增殖、關(guān)節(jié)發(fā)育與關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨基質(zhì)的形成、肢體血管生成以及肌肉組織的發(fā)育都有密切的關(guān)