ERβ與ER信號傳導(dǎo)通路MAPK在小鼠乳腺癌中相互作用機制.pdf

1、目的：利用已具備的小鼠乳腺癌模型--BCML-TA299體內(nèi)研究雌激素、雌激素受體拮抗劑及化療藥物環(huán)磷酰胺對雌激素受體β亞型(ERβ)與ER信號傳導(dǎo)通路-MAPK的作用，初步探討ERβ與MAPK信號傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵酶MEK-2和p-ERK的蛋白表達相關(guān)性，從而闡述ERβ與MAPK信號傳導(dǎo)通路在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及凋亡過程中的相互作用機制。 方法：將受試動物TA2系小鼠隨機分為對照組、三苯氧胺(TAM)組、雌二醇(E2)組、環(huán)磷酰胺(

2、CTX)組、聯(lián)合組(TAM+CTX)，在用BCML-TA299荷瘤小鼠的乳腺腫瘤原位移植基礎(chǔ)上，實驗組分別給予TAM、E2、CTX及TAM+CTX聯(lián)合干預(yù)，于不同時間點動態(tài)觀察腫瘤的大體形態(tài)、病理組織學(xué)形態(tài)；采用免疫組織化學(xué)技術(shù)對腫瘤組織中某些相關(guān)蛋白(ERβ、MEK-2、p-ERK)于不同時間點分組進行動態(tài)聯(lián)合檢測和對比，研究其分子生物學(xué)特性：采用流式細胞分析技術(shù)檢測不同時間點各組腫瘤細胞周期和細胞凋亡的改變，采用環(huán)DTPA法對對照組

3、、TAM組、聯(lián)合組小鼠尾靜脈注射放射性核素Sm-153，2ug/1mCi，進行細胞凋亡顯像。 結(jié)果：BCML-TA299乳腺癌原位移植瘤生長大致分3個時期，1-10天腫瘤生長緩慢，為腫瘤潛伏期，11-20天腫瘤生長迅速，大小約增加了7-10倍，為指數(shù)生長期，21-30天腫瘤大小增加了約1-2倍，為穩(wěn)定生長期，在移植瘤生長的早期和中期三組腫瘤大小差別不明顯，后期E2組腫瘤大小大于對照組和TAM組(P<0.01)；CTX組及聯(lián)合組腫

4、瘤生長緩慢，腫瘤小于另外三組，其中聯(lián)合組尤為明顯(P<0.01)；對照組、E2組瘤細胞生長活躍，呈侵襲性生長，核膜、核仁清楚，核分裂多見，瘤細胞間有豐富血管，變性壞死少見，而TAM組、CTX組及聯(lián)合組各期瘤細胞均呈不同程度的灶狀壞死，可見凋亡小體和壞死細胞形成的鈣化灶，瘤細胞腫脹，核亦腫脹，胞漿內(nèi)和胞核內(nèi)有空泡，核碎裂、核固縮多見，部分細胞核膜、核仁消失，核分裂少見，瘤組織間血管與同時期對照組和E2組比較減少，且壞死區(qū)域血管變性，其中聯(lián)

5、合組最為明顯，TAM組肺轉(zhuǎn)移出現(xiàn)較另外兩組為晚，E2組肺轉(zhuǎn)移率高于TAM組(P<0.05)；免疫組化結(jié)果顯示ERβ與MEK-2、p-ERK三種蛋白在各組腫瘤細胞中均有不同程度的表達，表達率為100％；E2可激活ERβ、MEK-2、p-ERK明顯上調(diào)，TAM和CTX均可抑制ERβ、MEK-2和p-ERK蛋白表達，聯(lián)合組尤為明顯，與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；ERβ的蛋白表達與MEK-2、p-ERK的蛋白表達呈正相關(guān)，ERβ與M

6、EK-2、p-ERK協(xié)同表達(P<0.01)；流式細胞分析提示E2可促進腫瘤細胞從G1期向S期轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細胞分裂增殖，腫瘤進展；TAM和CTX使腫瘤細胞停滯于G1期，細胞增殖受抑制，并促進細胞凋亡，TAM組和聯(lián)合組在G0期左側(cè)出現(xiàn)凋亡峰，凋亡率分別為2.3％和13.1％，與細胞凋亡顯像結(jié)果相符。 結(jié)論：E2可通過激活ERβ與MAPK信號傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵酶促進腫瘤生長，轉(zhuǎn)移發(fā)生；TAM和CTX可通過拮抗并下調(diào)ERβ、MEK-2和p