大黃素抗乳腺癌作用與Erα信號(hào)通路之間的關(guān)系及免疫調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、乳腺癌是一種雌激素依賴(lài)型腫瘤，許多證據(jù)表明，雌激素(Estradiol，E2)刺激是乳腺癌發(fā)生的一個(gè)重要致病因子，其生物學(xué)活性受雌激素受體α（estrogen receptorα，ERα）的調(diào)節(jié)。ERα通過(guò)介導(dǎo)基因組信號(hào)通路和非基因組信號(hào)通路發(fā)揮雌激素促增殖和抗凋亡作用，該信號(hào)通路的異常活化是乳腺癌發(fā)病的首要原因。目前，以他莫西芬為代表的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(selective estrogen receptor modulator，

2、SERM)是最具代表性的抗雌激素類(lèi)藥物，其作用機(jī)制主要靶向干預(yù)ERα信號(hào)通路。但隨著治療的深入，患者身上出現(xiàn)了不同程度的耐藥性問(wèn)題，并且多數(shù)對(duì)機(jī)體免疫功能起抑制和破壞等副作用。因此，尋找毒副作用小、安全有效的抗腫瘤藥物成為近些年各國(guó)學(xué)者的研究熱點(diǎn)。
　　近年來(lái)，天然產(chǎn)物因具有明顯的抗腫瘤活性及毒副作用小的特性而受到人們的高度關(guān)注。天然蒽醌類(lèi)化合物廣泛存在于自然界中，具有多種藥理學(xué)功效，可通過(guò)不同機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用。目前臨床上常用的

3、抗腫瘤藥物阿霉素及米托蒽醌的基本母核亦是蒽醌結(jié)構(gòu)，提示具有蒽醌類(lèi)母核結(jié)構(gòu)的化合物具有抗腫瘤活性。大黃素是從中藥材大黃、虎杖、蘆薈等分離得到的一種有較強(qiáng)抗腫瘤活性的天然蒽醌類(lèi)化合物，其抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用是目前人們研究的熱點(diǎn)。由于目前對(duì)大黃素抗乳腺癌作用及其信號(hào)機(jī)制還缺乏深入研究，關(guān)于大黃素抗乳腺癌作用與ERα信號(hào)通路的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外鮮見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，故本實(shí)驗(yàn)對(duì)大黃素體外抗乳腺癌作用與ERα信號(hào)通路之間的關(guān)系進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，并檢測(cè)了大黃素對(duì)機(jī)

4、體免疫的調(diào)節(jié)作用，旨在為研發(fā)和應(yīng)用新型抗乳腺癌藥物提供一定的理論依據(jù)。研究結(jié)果如下
　　1、采用MTT比色法，檢測(cè)大黃素體外對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，大黃素對(duì)ERα陽(yáng)性MCF-7細(xì)胞和ERα陰性MDA-MB-231細(xì)胞的增殖均有抑制作用，但是對(duì)ERα陽(yáng)性MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用更顯著，呈明顯的劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系。
　　2、采用MTT比色法和流式細(xì)胞儀分析，檢測(cè)大黃素對(duì)E2促細(xì)胞增殖和抗細(xì)胞凋亡作用的影響。結(jié)果顯

5、示，E2能夠顯著促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的體外增殖并抑制細(xì)胞凋亡，而大黃素能有效抑制E2誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞增殖和抗凋亡作用，將E2誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。
　　3、采用Western blotting方法和熒光素酶報(bào)告基因分析，檢測(cè)大黃素對(duì)MCF-7細(xì)胞中的雌激素受體α蛋白表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果顯示，大黃素對(duì)ERα蛋白表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄活性有顯著的抑制作用，呈劑量依賴(lài)性。
　　4、采用Western blot

6、ting方法，檢測(cè)大黃素對(duì)ERα靶基因蛋白CyclinD1和Bcl-2表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，大黃素對(duì)MCF-7細(xì)胞中ERα靶基因蛋白Cyclin D1和Bcl-2表達(dá)均有顯著抑制作用。
　　5、采用Western blotting方法，檢測(cè)大黃素對(duì)E2快速誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的MAPK/Erk(1)/2信號(hào)通路和PI3K/Akt信號(hào)通路的影響。結(jié)果顯示，大黃素能抑制E2誘導(dǎo)的Akt和MAPK蛋白的磷酸化，但是對(duì)Akt蛋白活性的抑制作

7、用更顯著。說(shuō)明大黃素干預(yù)ERα非基因組信號(hào)通路的作用主要通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)。
　　6、采用吞噬中性紅法和MTT比色法，檢測(cè)大黃素對(duì)非特異性免疫細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示，大黃素可提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的代謝活力及吞噬能力，呈劑量依賴(lài)關(guān)系。同時(shí)，大黃素可顯著提高NK細(xì)胞的活性，隨著藥物濃度的增加，NK細(xì)胞的活性逐漸增強(qiáng)，說(shuō)明大黃素對(duì)非特異性免疫細(xì)胞具有促進(jìn)作用。
　　7、采用MTT比色法，檢測(cè)大黃素對(duì)特異性免疫細(xì)胞的影