分娩發(fā)動前后PR啟動子區(qū)DNA甲基化水平改變的研究.pdf

1、早產是常見的妊娠并發(fā)癥及新生兒發(fā)病和死亡的主要原因。早產發(fā)病機理不明,發(fā)生率高。妊娠過程中子宮由靜息狀態(tài)逐漸增加收縮力即分娩啟動的機制目前是臨床研究熱點之一,因此分娩發(fā)動機制的研究顯得較為重要。目前推測哺乳動物分娩啟動機制研究中主要有三種因素相關:黃體溶解、胎盤P450c17羥化酶上調和孕激素受體功能改變。近年來對孕激素受體功能改變如功能性孕激素撤退機制的研究較多。
　　孕激素是維持子宮靜息狀態(tài)的重要激素,孕激素有兩種重要的受體即

2、PRA和PRB,且受體之間作用各異。在分娩啟動前子宮處于靜息狀態(tài),而分娩時子宮肌收縮但孕激素水平并未降低反而升高。而功能性孕激素撤退機制就是指在分娩啟動時孕激素受體之間發(fā)生比例改變,即功能性孕激素撤退使子宮平滑肌由靜息狀態(tài)轉為收縮導致分娩發(fā)生。
　　人類孕激素受體(PR)的基因位于11q22-23,長度大于90kb,包含8個外顯子,有PRA與PRB兩種分型受體兩種亞型受體。PRA和PRB是兩種生理功能不同的孕激素受體亞型,由于PR

3、A的N端缺少164個氨基酸,長度短于PRB,而在這段氨基酸序列中包含有AF3轉錄激活區(qū),所以只有PRB有轉錄激活的作用,PRA主要是抑制PRB的基因轉錄。近期大量研究表明分娩后PRA相對于PRB表達升高,強調了分娩前后孕激素受體亞型比例改變對于分娩啟動機制的重要性。而在一些孕激素受體表達的研究中也顯示表觀遺傳即DNA甲基化和組蛋白乙酰化可以影響其表達。DNA甲基化與組蛋白去乙?；够虺聊?表達下調,而去甲基化與組蛋白乙酰化則相反會激活

4、基因,表達上調。在子宮內膜癌中,由于PR的DNA超甲基化,使PR基因沉默,表達下調。分娩啟動研究中表觀遺傳學的研究尚少,有文章表明分娩子宮肌層中PR啟動子區(qū)存在高組蛋白乙酰化和H3K4me3,但尚無DNA甲基化與PR表達相關分娩啟動的研究。那么,在分娩啟動前后是否存在PR基因的甲基化狀態(tài)改變使不同受體表達改變導致分娩的發(fā)生?
　　為了明確分娩啟動前后子宮平滑肌孕激素受體的表達及其甲基化狀態(tài)的改變,本研究選取臨產(IL)孕婦做為研究

5、組,未臨產(NIL)孕婦做為對照組,活檢取子宮下段肌層組織,通過免疫組化檢測PR及PRB在子宮肌層中的表達及定位,采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測子宮肌層中PR、PRB、DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)的表達,并結合臨床資料對檢測結果進行統(tǒng)計學分析;同時通過BSP技術檢測分娩前后子宮肌層中PRA及PRB的甲基化狀態(tài);通過分離培養(yǎng)子宮平滑肌細胞,觀察DNA甲基轉移酶抑制劑(5-Aza-dC)對處理前后子宮平

6、滑肌細胞孕激素受體表達的影響,以期了解體外子宮平滑肌細胞DNA甲基化與PRs表達關系。
　　研究結果顯示,PR和PRB在臨產及未臨產的子宮平滑肌中都有明顯的表達,且定位于細胞核中。PRA、PRA/PRB在臨產的表達與未臨產存在顯著差異,PRB在臨產與未臨產無顯著差異,結果提示PRA表達升高及PRA/PRB比值升高可能與分娩啟動有關。BSP檢測PRA和PRB啟動子區(qū)的DNA甲基化狀態(tài),結果顯示:與未臨產妊娠相比,臨產妊娠的子宮平滑肌