HCV免疫學(xué)診斷抗原與鏈親和素融合蛋白的制備及應(yīng)用研究.pdf

1、丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）主要以血液和性傳播，其感染后，極易發(fā)展為慢性丙型肝炎，部分患者進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝細(xì)胞癌，嚴(yán)重危及人們的生命[1]。其發(fā)病隱匿，癥狀不典型，加之公眾對(duì)其認(rèn)知水平較低，因此病毒的傳播不易控制，患者也容易因不能及時(shí)診斷而錯(cuò)過治療的最佳時(shí)機(jī)。因此，及時(shí)對(duì)HCV相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于控制HCV傳播、早期診斷以及提高治療效果有著至關(guān)重要的意義。
　　 HCV抗體檢測(cè)誕生于20世紀(jì)90

2、年代初，是最早用于HCV實(shí)驗(yàn)室診斷的方法，具有操作簡便、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛運(yùn)用于血液制品的篩查和臨床診斷。最常用的抗-HCV診斷試劑采用間接酶聯(lián)免疫法(ELISA)，根據(jù)包被抗原的組成和質(zhì)量的不同，抗-HCV檢測(cè)試劑的發(fā)展經(jīng)歷了三代。目前我國最常采用的是第三代抗-HCVELISA試劑，其質(zhì)量雖較前兩代已有很大提高[2]，但仍然存在一定程度的漏檢和假陽性[3.4]
　　 本論文的設(shè)計(jì)思路是：利用鏈親和素(SA)與生物素能高效、特

3、異結(jié)合的特性，制備HCV免疫學(xué)診斷抗原與SA的融合蛋白，并初步探討其在抗-HCVELISA檢測(cè)中的應(yīng)用，以期達(dá)到更好的檢測(cè)效果。
　　 方法：構(gòu)建了HCV免疫學(xué)診斷抗原(C44P)與鏈親和素(SA)融合蛋白重組表達(dá)質(zhì)粒pET-11d-C44P-SA，在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)，并用Westernblot進(jìn)行鑒定，表達(dá)的融合蛋白經(jīng)鎳金屬螯合(Ni-NTA)層析柱進(jìn)行純化，透析復(fù)性后分別包被生物素化以及普通酶聯(lián)板，進(jìn)行人血清

4、抗-HCV檢測(cè)。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建了帶有SA標(biāo)簽的重組表達(dá)質(zhì)粒，其在大腸桿菌BL21(DE3)中實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)，制備的融合蛋白純度可達(dá)90％以上，建立ELISA法進(jìn)行人血清抗-HCV檢測(cè)顯示：融合蛋白包被生物素化酶聯(lián)板的檢測(cè)靈敏度與特異性明顯高于普通酶聯(lián)板。
　　 結(jié)論：構(gòu)建的融合蛋白作為包被抗原，利用SA標(biāo)簽與生物素化酶聯(lián)板的高效、特異結(jié)合，提高了抗-HCV檢測(cè)的靈敏度與特異性，為進(jìn)一步提高抗-HCV檢測(cè)試劑的質(zhì)量打