癌相關(guān)基因CXorf36功能的初步研究.pdf

1、目的：我們用生物信息學(xué)分析篩選得到一個(gè)在多種癌組織中高表達(dá)，而在癌旁正常組織低表達(dá)的新基因CXorf36(chromosome X open reading frame 36)，并用RT-PCR方法在組織和細(xì)胞系中加以驗(yàn)證.以了解CXorf36在多種癌組織的陽性表達(dá)情況，從而希望得到一種篩查癌癥的新方法。 材料與方法： 1材料：標(biāo)本選自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院外科2006年1月至2007年12月的癌癥手術(shù)治療患者。786-O

2、、A498、Caki三種腎癌細(xì)胞系為北京大學(xué)人民醫(yī)院泌尿研究所提供。宮頸癌Hela、肝癌HepG2、結(jié)腸癌Lovo、肺腺癌A549、前列腺癌PC3細(xì)胞系為北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生化實(shí)驗(yàn)室提供。 2方法：分別取肝癌，膽管癌，胃癌，結(jié)直腸癌，腎癌的病人(均術(shù)后病理檢查證實(shí))手術(shù)切除的腫瘤標(biāo)本癌組織和癌旁組織(位置距離癌組織至少5厘米)作對照。分為5組，分別為肝癌10例，膽管癌5例，胃癌15例，大腸癌10例，腎癌10例。組織標(biāo)本行RT-PCR

3、方法檢測CXorf36mRNA在各組的表達(dá)情況。同時(shí)行RT-PCR方法檢測CXorf36mRNA在宮頸癌Hela、肝癌HepG2、結(jié)腸癌Lovo、肺腺癌A549、前列腺癌PC3細(xì)胞系和786-O、A498、Caki三種腎癌細(xì)胞系的表達(dá)情況。 3數(shù)據(jù)處理：所得結(jié)果運(yùn)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，每組計(jì)量資料均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，五組計(jì)量資料間均數(shù)比較采用方差分析。以a=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果： 1癌組織

4、和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達(dá)情況CXort36 mRNA在癌組織和癌旁正常組織表達(dá)情況，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，依次為：4.27±0.87、0.47±0.23。癌組織CXorf36 mRNA表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.051)。CXorf36 mRNA在各組癌組織(肝癌組、膽管癌組、胃癌組、結(jié)直腸癌組、腎癌組)表達(dá)情況，以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，依次為：4.39±0.8 1、4.10±0.97、4.28±0

5、.69、4.46±0.64、4.09±1.26，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。CXorf36 mRNA在各組癌旁正常組織(肝癌組、膽管癌組、胃癌組、結(jié)直腸癌組、腎癌組)的表達(dá)情況以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，依次為：0.49±0.24、0.49±0.29、0.47±0.23、0.46±0.20、0.45±0.28，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 2肝癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達(dá)情況CXorf36 mRNA在

6、肝癌癌組織和癌旁正常組織表達(dá)情況，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，依次為：4.39±0.81、0.49±0.24。肝癌癌組織CXorf36 mRNA表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3膽管癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達(dá)情況CXorf36 mRNA在膽管癌癌組織和癌旁正常組織表達(dá)情況，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，依次為：4.10±0.97、0.49±0.29。膽管癌癌組織CXort36 mRNA表達(dá)明

7、顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 4結(jié)直腸癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達(dá)情況 CXorf36 mRNA在結(jié)直腸癌癌組織和癌旁正常組織表達(dá)情況，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，依次為：4.28±0.69、0.47±0.23。結(jié)直腸癌癌組織CXorf36 mRNA表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 5胃癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達(dá)情況CXorf

8、36 mRNA在胃癌癌組織和癌旁正常組織表達(dá)情況，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，依次為：4.46±0.64、0.46±0.20。胃癌癌組織CXort36 mRNA表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 6腎癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達(dá)情況CXort36 mRNA在腎癌癌組織和癌旁正常組織表達(dá)情況，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，依次為：4.09±1.26、0.45±0.28。腎癌癌組織CXorf36 mR

9、NA表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 7CXorf36基因mRNA在腫瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況CXorf36基因mRNA在3種腎癌細(xì)胞系(786-O、A498、Caki)以及前列腺癌細(xì)胞(PC3)、結(jié)腸癌細(xì)胞(LOVO)、宮頸癌細(xì)胞(Hela)、肺腺癌細(xì)胞(A549)、肝癌細(xì)胞(HepG2)中的表達(dá)豐度很低。 8CXorf36基因克隆和氨基酸序列分析： CXorf36基因序列全長由http

10、：//www.genome.ucsc.edu/獲得，編碼區(qū)序列全長用RT-PCR方法從癌組織總RNA擴(kuò)增得到.推譯的蛋白含有182個(gè)氨基酸，預(yù)測分子量20.7kDa。氨基酸序列分析顯示CXorf36蛋白有六個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn)和兩個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)，沒有酪氨酸磷酸化位點(diǎn)。比對分析顯示CXorf36蛋白與小鼠來源的猜測蛋白LOC75905氨基端有79％的同源性，而該小鼠猜測蛋白可能是一種水解酶。 結(jié)論： 1CXorf36 m

11、RNA在惡性腫瘤中腫瘤組織有明顯高表達(dá)，說明Cxorf36基因可能參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移侵襲過程，并在其中發(fā)揮重要作用。 2CXorf36 mRNA在肝癌、膽管癌、結(jié)直腸癌、胃癌和腎癌的腫瘤組織明顯高表達(dá)，而在相對應(yīng)的正常組織中表達(dá)明顯降低，說明肝癌、膽管癌、結(jié)直腸癌、胃癌和腎癌均為表達(dá)癌相關(guān)基因CXorf36的腫瘤譜。癌相關(guān)基因CXorf36可能作為腫瘤篩查監(jiān)測、檢測腫瘤是否侵襲轉(zhuǎn)移、以及判斷預(yù)后、了解早期復(fù)發(fā)的有效指