重組人干擾素納米磁性脂質(zhì)體的構(gòu)建及靶向治療人原發(fā)性肝癌的研究.pdf

1、腫瘤靶向治療是利用特定的載體將藥物在特定的導(dǎo)向機(jī)制作用下選擇性地定位于腫瘤組織，提高腫瘤組織內(nèi)的藥物濃度，達(dá)到提高療效、降低毒副反應(yīng)、增加病人順從性的目的。在本系列實(shí)驗(yàn)中，采用逆相蒸發(fā)法研制了納米級(jí)磁性干擾素脂質(zhì)體，考察了磁性干擾素納米脂質(zhì)體的體外穩(wěn)定性、體內(nèi)外磁場(chǎng)響應(yīng)性和在原發(fā)性肝癌移植瘤裸鼠體內(nèi)的生物分布，我們也進(jìn)行了MIL靜注后動(dòng)物的溶血性和急毒性實(shí)驗(yàn)，以及用雙抗夾心ELISA法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在外加磁場(chǎng)和不加磁場(chǎng)兩種狀態(tài)下，

2、藥物干預(yù)后動(dòng)物的血藥濃度和組織濃度方面的藥動(dòng)學(xué)研究。分別用MTT法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法、吖啶橙染色法和DNAladder法進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡檢測(cè)。還進(jìn)行了MIL靶向治療原發(fā)性肝癌移植瘤裸鼠后的分子生物學(xué)方面的機(jī)理探討。 主要研究結(jié)果如下： 1、磁性干擾素納米脂質(zhì)體粒徑平均170nm，干擾素包封率62.71％，磁性顆粒均勻分布于脂質(zhì)體中。不同的類脂比例、藥脂比、有機(jī)溶劑種類和油水相體積比影響磁性干擾素納米脂質(zhì)體粒徑和干擾素包封

3、率。制備后4℃和-20℃保存，8h內(nèi)滲漏率較低。結(jié)果提示磁性納米脂質(zhì)體有可能作為干擾素的新型載體應(yīng)用于惡性腫瘤的靶向治療中。 2、磁性干擾素納米脂質(zhì)體體外、體內(nèi)具有良好的磁場(chǎng)響應(yīng)性。應(yīng)用磁性納米脂質(zhì)體加磁場(chǎng)的方式給藥，干擾素可以有效地聚集到靶部位，顯著提高靶部位干擾素的濃度，降低其它組織和器官中的藥物濃度。作為干擾素的有效載體，磁性納米脂質(zhì)體加磁場(chǎng)的給藥方式有望成為腫瘤靶向治療的新途徑。 3、通過(guò)溶血實(shí)驗(yàn)和急毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

4、發(fā)現(xiàn)MIL在動(dòng)物體內(nèi)用藥是安全的；采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)IFN組、MIL組(加磁場(chǎng))和MIL組(不加磁場(chǎng))在小鼠體內(nèi)i.V.后血清和組織中的藥物濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在MIL組(加磁場(chǎng))，藥物在肝和腎內(nèi)濃度明顯升高(p<0.01)，且滯留時(shí)間延長(zhǎng)，肝和腎外各組織藥物濃度低。說(shuō)明：MIL在外加磁場(chǎng)作用下，藥物在靶區(qū)的靶向選擇性最好，滯留時(shí)間延長(zhǎng)：與普通IFN相比，在外加磁場(chǎng)的作用下，MIL改變了IFN在小鼠體內(nèi)的分布特性，延長(zhǎng)了IFN的

5、半衰期，提高了IFN的生物利用度，具有很強(qiáng)的靶向性和緩釋性。 4、分別用游離IFN、ML、IL和MIL對(duì)體外培養(yǎng)的Bel-7402腫瘤細(xì)胞進(jìn)行藥物干預(yù)，然后再分別用MTT法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法、吖啶橙染色法和DNAladder法進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：各組Bel-7402腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制，并且出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較顯示：MIL組和IL組明顯高于游離IFN組，而游離IFN組明顯高于ML組和對(duì)照組(僅含培

6、養(yǎng)基)。以上結(jié)果均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。以上結(jié)果說(shuō)明MIL能夠顯著抑制Bel-7402細(xì)胞的生長(zhǎng)，其作用機(jī)制是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 5、在原發(fā)性肝癌移植瘤裸鼠腫瘤組織外固定永久磁鐵后，靜脈注射磁性干擾素納米脂質(zhì)體可以顯著抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)，抑瘤率為62.50％，高于IFN(27.61％)和IL(28.17％)；RT-PCR顯示，MIL的VEGFmRNA表達(dá)明顯低于對(duì)照組和其它實(shí)驗(yàn)組(p<0.01)，而MIL的Caspa

7、se-3mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組和其它實(shí)驗(yàn)組(p<0.01)；Western-blot顯示，MIL的VEGF蛋白表達(dá)明顯低于對(duì)照組和其它實(shí)驗(yàn)組(p<0.01)，而MIL的Caspase-3蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組和其它實(shí)驗(yàn)組(p<0.01)。 本研究提示作為化療藥物的新型載體磁性納米脂質(zhì)體在腫瘤部位磁場(chǎng)的作用下可以有效提高腫瘤組織內(nèi)化療藥物濃度減低化療藥物毒副反應(yīng)顯著抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)。本研究為磁性納米脂質(zhì)體作為化療藥物載體進(jìn)一