炎癥對脂肪細胞功能的影響及其機制探討.pdf

1、第一部分，目的：腫瘤壞死因子α(TNF-α)作為促炎因子對脂肪細胞功能有多方面的影響，包括促進細胞分化、脂解及脂肪因子分泌等。本文擬研究TNF-α對傳代培養(yǎng)的兔皮下脂肪細胞膽固醇流出功能的影響，及可能的作用機制。 方法 來源于兔腹股溝皮下的脂肪細胞以不同濃度的TNF-α(5，10，20ng/ml)干預24小時。用液體閃爍計數(shù)儀測量脂肪細胞對氚標膽固醇的流出率。用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)檢測過氧化物酶體增殖物激

2、活受體γ(PPARγ)、肝X受體α(LXR α)及三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)的mRNA表達。 結(jié)果 1．5或10 ng/ml TNF-α干預脂肪細胞24小時，可使膽固醇流出率增加，且10 ng/ml TNF-α作用最強(7.03±1.17％)，較對照組(3.92±0.46％)明顯增高。但20ng/ml TNF-α反而使膽固醇流出率較10 ng/ml時下降了16.2％(P<0.05)。 2．5或10

3、ng/ml TNF-α可上調(diào)ABCA1表達，其表達量分別為0.44±0.17和0.91±0.26，與對照組0.20±0.06相比差異有顯著性。20 ng/ml TNF-α使ABCA1表達有所下降(0.69±0.13)。與此同時，TNF-α可調(diào)節(jié)脂肪細胞PPARγ和LXR α表達。在TNF-α≤10 ng/ml時起促進作用，在20 ng/ml時起抑制作用。 3．預先以PPARγ特異性抑制劑GW9662孵育半小時，可抑制10 ng/

4、ml TNF-α對PPARγ(0.88±0.22 vs 1.37±0.25，P<0.05)和LXR α(0.51±0.14 vs 0.32±0.08，P<0.05)的誘導作用。 結(jié)論：TNF-α影響脂肪細胞膽固醇流出及其ABCA1表達，這種作用與TNF-α對脂肪細胞PPARγ-LXR α的雙重調(diào)節(jié)作用有關。 第二部分，目的:脂肪細胞肥大伴隨一系列功能改變。我們擬研究在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)誘導脂肪細胞負荷脂質(zhì)后，

5、TNF-α對其膽固醇流出和ABCA1表達的影響是否會發(fā)生改變。 方法 用50μg/ml oxLDL孵育脂肪細胞24小時制造荷脂模型。再以不同濃度TNF-α(5，10，20 ng/ml)干預24小時，觀察膽固醇流出變化及用RT-PCR法檢測脂肪細胞PPARγ、LXR α和ABCA1 mRNA表達。 結(jié)果 1．OxLDL可使脂肪細胞膽固醇流出增加(7.46±2.34％ vs 3.92±0.46％)，PPARγ

6、(1.07±0.26 vs 0.48±0.12)、LXR α(0.83±0.16vS 0.32±0.08)和ABCA1(1.19±0.32 vs 0.20±0.06)表達上升，P均<0.05。 2．TNF-α抑制荷脂脂肪細胞膽固醇流出，10 ng/ml時作用最強(6.02±0.31％vs3.92±0.46％)，在20 ng/ml時脂肪細胞膽固醇流出率略有回升(6.12±0.53)，差異有顯著性。 3．從5ng/ml到20

7、ng/ml TNF-α，PPARγ表達量分別為0.93±0.21，0.77±0.15，0.60±0.16與oxLDL對照組1.07±0.26相比表達降低。LXR α表達量為0.72±0.19，0.61±0.17，0.49±0.09與OXLDL對照組0.83±0.16相比也有降低。TNF-α呈濃度依賴性抑制脂肪細胞PPARγ和LXR α表達。5 ng/ml和10 ng/ml TNF-α分別使脂肪細胞ABCA1表達下降了14.4％和34.5

8、％，20ng/ml TNF-α使ABCA1表達有所回升。 結(jié)論:在oxLDL誘導荷脂的脂肪細胞中，TNF-α對PPARγ和LXRα表達主要表現(xiàn)為抑制作用，并在一定程度上影響到ABCA1表達及脂肪細胞膽固醇流出。 第三部分，目的:姜黃素是一類中藥提取物，已證實其具有抗炎、抗氧化及改善血脂異常等作用。本研究觀察了姜黃素對脂肪細胞抗炎脂肪因子脂聯(lián)素表達和分泌的影響，初步評價姜黃素對脂肪細胞功能的影響。 方法 新

9、西蘭大白兔腹股溝皮下脂肪細胞以不同濃度姜黃素(5，10，20μg/ml)孵育24小時，用ELISA試劑盒檢測細胞培養(yǎng)上清液脂聯(lián)素水平，并用RT-PCR方法檢測脂聯(lián)素及其上游因子PPARγ的表達。 結(jié)果 5.μg/ml至20μg/ml姜黃素分別使兔皮下脂肪細胞脂聯(lián)素分泌水平較對照組(3.13±0.21μmol/l)增加(3.93±0.26，4.49±0.34，5.21±0.39 μmol/l)。脂聯(lián)素mRNA表達也較對照組