高糖刺激對(duì)雪旺細(xì)胞增殖與凋亡機(jī)制的探討.pdf

1、研究背景：
　　糖尿病周?chē)窠?jīng)病變（diabeticperipheralneuropathy,DPN）是2型糖尿病(type2diabeticmellitus，T2DM)患者最為常見(jiàn)、最為復(fù)雜的慢性并發(fā)癥之一，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)約70％～80％的患者會(huì)出現(xiàn)不同程度的感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能的損害，從而影響患者的生存及生活質(zhì)量。到目前為止糖尿病周?chē)窠?jīng)病變的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，其可能機(jī)制是多方面因素綜合作用的結(jié)果，既有代謝因素又有血管因素的影響;

2、如氧化應(yīng)激、多元醇通路的代謝異常、糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)的積聚等。糖尿病周?chē)窠?jīng)病變至今尚無(wú)有效的治療方法，因此如何有效的遏制其發(fā)生發(fā)展成為目前眾學(xué)者們研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。
　　脂素lipin家族是新發(fā)現(xiàn)的一種可調(diào)控機(jī)體脂肪儲(chǔ)存及代謝方式的脂肪因子，它是由LPIN基因表達(dá)產(chǎn)生的，包括lipin-1、lipin-2、lipin-3。其中l(wèi)ipin-1具有兩方面作用，一是作為磷脂酸磷脂酶(phosphatidicacidphospha

3、teesterenzyme，PAP)1，催化磷脂酸的去磷酸化作用，產(chǎn)生甘油三酯和無(wú)機(jī)磷酸鹽;二是作為轉(zhuǎn)錄協(xié)同刺激因子聯(lián)系肝過(guò)氧化物酶增殖物活化受體(PPAR)γ協(xié)同刺激因子1α(PGC1α)和PPARα，調(diào)節(jié)脂肪酸利用和脂肪合成基因的表達(dá)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，lipin-1缺乏可導(dǎo)致成熟神經(jīng)外膜脂肪墊和雪旺細(xì)胞中PAP活性喪失，磷脂合成減少，進(jìn)而影響外周神經(jīng)髓鞘的形成，導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢;并且PAP底物磷脂酸的積聚還可以激活MEK-Erk

4、旁路，誘發(fā)異常信號(hào)的產(chǎn)生，促進(jìn)雪旺細(xì)胞的退化及凋亡，加重周?chē)窠?jīng)病變。神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nervegrowthfactor，NGF）是其家族中發(fā)現(xiàn)最早、研究最深入的一類(lèi)生長(zhǎng)因子，它對(duì)于神經(jīng)遞質(zhì)的合成，蛋白磷酸化及甲基化所需酶的合成，神經(jīng)元正常功能的維持以及損傷后的修復(fù)過(guò)程是必不可少的。研究發(fā)現(xiàn)，DPN時(shí)周?chē)窠?jīng)修復(fù)功能障礙，，而這些改變與NGF的缺乏、合成減少及受體蛋白的表達(dá)減少密切相關(guān)，從而加重周?chē)窠?jīng)病變。
　　研究目的：

5、　　本研究旨在觀察高濃度葡萄糖刺激對(duì)雪旺細(xì)胞增殖及凋亡的影響并初步探討其可能機(jī)制;以及高糖刺激時(shí)雪旺細(xì)胞中l(wèi)ipin-1、NGF蛋白表達(dá)水平的變化。
　　研究方法：
　　將體外培養(yǎng)的RSC96雪旺細(xì)胞分為正常對(duì)照組(25mmol/L)和高糖組(100mmol/L)，分別應(yīng)用MTT法及流式細(xì)胞技術(shù)觀察高糖刺激對(duì)RSC96雪旺細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡的影響;應(yīng)用Western-blotting觀察高糖對(duì)lipin-1、NGF蛋白表達(dá)的

6、影響;同時(shí)采用免疫熒光技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證在高糖刺激時(shí)雪旺細(xì)胞lipin-1蛋白表達(dá)變化。數(shù)據(jù)的處理均采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組比較，高糖組對(duì)RSC96細(xì)胞增殖具有顯著抑制作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn):高糖組細(xì)胞晚期凋亡率（12.4±0.65）