siRNA下調(diào)NRP-1表達對人腦膠質(zhì)瘤細胞系U373MG細胞生長和MAPK信號通路的影響.pdf

1、siRNA下調(diào)NRP1表達對人腦膠質(zhì)瘤細胞系U373MG細胞生長和MAPK信號通路的影響TheinfluenceofsiRNAinterferingNRP1geneexpressiononU373MGhumangliomacellgrowthMAPKsignalingpathways碩士研究生：李祥云導(dǎo)師：黃延焱副教授導(dǎo)師小組成員：周厚廣副教授盧曉喆主治醫(yī)師復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院2012年4月老年科碩士學(xué)位論文中文摘要siRNA下調(diào)NRP

2、1表達對人腦膠質(zhì)瘤細胞系U373MG細胞生長和MAPK信號通路的影響中文摘要研究背景膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)腫瘤，其惡性程度高，侵襲性強，術(shù)后易復(fù)發(fā)，是最棘手的難治性腫瘤之一。高度惡性的多形性膠質(zhì)母細胞瘤患者的1年和2年生存率分別為58%和31%。對膠質(zhì)瘤發(fā)病機制的研究和尋找新的治療紀點是膠質(zhì)瘤研究領(lǐng)域亟待解決的基本問題。神經(jīng)菌毛素l(Neuropilinl，NRPl)是細胞膜表面的一種單向跨膜糖蛋白，主要表達在血管內(nèi)皮細胞、腫瘤細胞及神經(jīng)

3、細胞等，屬于非酪氨酸激酶輔助受體。在人類多種腫瘤組織中，NRP1均有過度表達的現(xiàn)象，對相關(guān)腫瘤的發(fā)生發(fā)展起著重要促進作用。研究發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤患者的病理標本中，NRP1亦呈現(xiàn)高表達，且與膠質(zhì)瘤的惡性程度及患者預(yù)后密切相關(guān)。目前NRP1在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作甩及其分子機制尚未完全明確阻礙了膠質(zhì)瘤的分子機制研究及以NRP1作為干預(yù)靶點探索膠質(zhì)瘤治療新方法的進程。絲裂原活化蛋白激酶（MitogenactivatedproteinkinaseM

4、APK)通路是經(jīng)典的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，具有調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、存活、轉(zhuǎn)化及凋亡等多重功能，與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等相關(guān)密切。而NRP1對腦膠質(zhì)瘤的影響是否與MAPK信號通路有關(guān)，目前國內(nèi)外尚未見相關(guān)報道。第一部分NRP1在腦膠質(zhì)瘤細胞系中的表達及髙效NRP1siRNA序列的設(shè)計、合成和蹄選目的觀察NRP1蛋白在不同膠質(zhì)母細胞瘤細胞系的表達情況，選取NRP1呈現(xiàn)較高表達的細胞系用于本實驗，以及設(shè)計、合成和篩選高效NRP1s

5、iRNA序列。材料和方法1.運用Westernblot(蛋白免疫印跡法）檢測惡性膠質(zhì)瘤細胞系LN319、U373MG、U87MG、U118MG和U251MG中NRP1蛋白的表達情況。2.訂購Ambion公司化學(xué)合成的siRNA|C向NRP1基因的兩個目標序列分別為：NRP1siRNAl5AAGCTCTGGGCATGGAATCAG3；NRP1siRNA25，AAAGCCCCGGGTACCTTACAT3，。將U373MG細胞（Western