凋亡蛋白酶8及BAX在帕金森病發(fā)病機制中作用的實驗研究.pdf

1、青島大學碩士學位論文凋亡蛋白酶8及BAX在帕金森病發(fā)病機制中作用的實驗研究姓名：趙君申請學位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：謝安木20071125中文摘要凋亡蛋白酶8及Bax在帕金森病發(fā)病機制中作用的實驗研究摘要目的：通過帕金森病動物模型，研究死亡受體凋亡通路的Caspase一8、Bax蛋白和mRNA的不同時間的表達，動態(tài)觀察Caspase8、Bax在帕金森大鼠模型黑質(zhì)、紋狀體中的表達情況，從蛋白水平、核酸水平探討Caspase8、B

2、ax在帕金森病發(fā)病機制中的作用，以進一步探討凋亡在帕金森病發(fā)病機制中的具體作用。方法：選用健康雄性SD大鼠72只(實驗動物動物中心提供)，體重2202409，隨機分為六組：對照組12只和PD模型三天組、一周組、兩周組、三周組、四周組，每組12只。利用6一羥多巴立體定向注入大鼠黑質(zhì)，制作帕金森動物模型，對照組注射生理鹽水。成功的帕金森病模型大鼠為阿樸嗎啡腹腔注射，觀察大鼠旋轉(zhuǎn)每分大于6次。取成功的模型數(shù)的術(shù)側(cè)中腦黑質(zhì)及紋狀體用免疫組化(T

3、HC)法檢測Caspase8、Bax、TH的蛋白表達情況，用原位雜交檢測了Caspase一8、BaxmRNA的表達，動態(tài)觀察不同時相的表達，與對照組比較。結(jié)果：棕黃色染色位于bax和caspase8蛋白表達陽性細胞胞漿，彌漫性分布，核膜周圍最濃，可見棕黃色顆粒。各組都檢測到了bax和caspase8的陽性細胞。PD組caspase8及Bax蛋白和mRNA密度3d明顯高于其他時點，從3d21d逐漸降低，21d與28d無顯著變化，但PD組均

4、顯著高于對照組。與之相反黑質(zhì)及紋狀體TH表達模型組顯著減少，3d明顯低于對照組，從3d“21d逐漸降低，21d與28d無顯著變化，但PD組均顯著低于對照組。結(jié)論：6OHDA能誘發(fā)大鼠黑質(zhì)細胞凋亡，Caspase8、Bax蛋白及mRNA的表達增高，TH蛋白表達減少，提示Caspase8、Bax參與帕金森病多巴胺能神經(jīng)元凋亡的發(fā)病機制，從而表明Caspase8是帕金森病動物模型發(fā)病機制的重要啟動因素。Bax作為前凋亡蛋白在啟動和誘導黑質(zhì)細胞