大蒜辣素生物合成、穩(wěn)定性研究及相關(guān)物質(zhì)分析.pdf

1、目的：本研究以大蒜中提取的蒜氨酸和蒜酶為原料，生物合成制備大蒜辣素。在前期建立的蒜酶活力測定方法和蒜氨酸、大蒜辣素測定方法基礎(chǔ)上，研究蒜酶催化裂解蒜氨酸的配比，從而為蒜氨酸/蒜酶二元制劑的研究建立基礎(chǔ)；考察大蒜辣素溶液的穩(wěn)定性，研究和探討影響穩(wěn)定性因素。由于生物合成大蒜辣素所使用的蒜氨酸和蒜酶原料為中試生產(chǎn)得到，原料中的雜質(zhì)可能會對制備得到的大蒜辣素溶液的純度造成影響，通過液質(zhì)聯(lián)用方法，對于大蒜辣素溶液中的雜質(zhì)和相關(guān)物質(zhì)及降解產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)

2、構(gòu)解析，分析雜質(zhì)來源，從而提出改進(jìn)和優(yōu)化生物合成大蒜辣素的工藝條件。方法：1.綜合考慮所使用蒜氨酸原料的含量和經(jīng)濟(jì)性，通過HPLC 對反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行測定，確定蒜酶催化蒜氨酸生物合成大蒜辣素工藝中的原料配比、反應(yīng)溫度、投料方式等。2.參考?xì)W洲藥典中潛在大蒜辣素含量測定方法，HPLC 測定考察三個(gè)溫度條件下的大蒜辣素溶液的穩(wěn)定性，計(jì)算半衰期作為評價(jià)穩(wěn)定性的標(biāo)準(zhǔn)。3.通過液質(zhì)聯(lián)用測定大蒜辣素溶液和蒜氨酸原料，建立HPLC-MS分析方法，進(jìn)行相應(yīng)

3、物質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析和確證。結(jié)果：1.確定大蒜辣素生物合成工藝中的蒜氨酸和蒜酶配比為1mg蒜氨酸需要1.3U 蒜酶，綜合蒜酶活性和大蒜辣素穩(wěn)定性確定25℃為反應(yīng)溫度，由于蒜酶為自殺式酶，生成的大蒜辣素抑制蒜酶活力，故經(jīng)考察分次將蒜酶溶液滴加到蒜氨酸中用最少的蒜酶量制備大蒜辣素，結(jié)合膜分離技術(shù)濾除蒜酶等大分子物質(zhì)。2.影響大蒜辣素穩(wěn)定性的因素除了溫度原因之外，還有空氣中的氧氣對于亞砜基氧化作用等，采用隔絕空氣等方法提高穩(wěn)定性。3.HPLC-MS