人參皂甙與青蒿琥酯配伍對佐劑性關(guān)節(jié)炎血管新生及滑膜細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察中藥有效成分人參皂甙與青蒿琥酯配伍對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AdiuVant Anhritis，AA)的治療作用及其對AA大鼠血清和滑膜血管新生誘導因子-血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growch factor，VEGF)、成纖維細胞生長因子(Fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)表達以及滑膜細胞凋亡的影響。 方法：1選擇體重150-180g的Wistar大鼠，雌雄各半，測

2、量雙側(cè)足爪容積后，于其右后足跖部常規(guī)消毒后皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(O.1ml/只)建立AA模型。2造模后第19天將成模大鼠隨機分為模型組、空白對照組、青蒿琥酯與人參皂甙配伍組(各80mg/kg.d)、人參皂甙組(80 mg/kg.d)、青蒿琥酯組(80 mg/kg.d)、甲氨喋呤組(1.6 mg/kg.d)，每組10只。當日用容積測量儀測量各組大鼠雙側(cè)足爪容積。治療各組連續(xù)灌胃給藥21天。給藥前后觀察大鼠的一般情況，并記錄體重。于給藥后第

3、22天再次測定各組大鼠足爪容積，觀察藥物對關(guān)節(jié)腫脹的抑制作用。3經(jīng)腹主動脈采血，離心，取血清，放射免疫分析法測定大鼠血清中白介素-1 β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor-α，TNF-α)含量，ELISA法測定VEGF、bFGF含量。4取血后立即取踝關(guān)節(jié)進行固定、脫鈣、石蠟包埋、髓染色，光鏡觀察其病理變化，并計算關(guān)節(jié)病理積分。無菌取出踝關(guān)節(jié)處的滑膜組織，應用免疫組織化

4、學法檢測滑膜組織中的VEGF、bFGF的表達。5取大鼠成纖維樣滑膜細胞株RSC-364，常規(guī)方法復蘇、培養(yǎng)。MTT比色分析法測定青蒿琥酯與人參皂甙及二者配伍對滑膜細胞增殖作用影響的量效關(guān)系和時效關(guān)系。收集滑膜細胞培養(yǎng)上清液，ELISA法測定VEGF含量。脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記法(TUNEL)檢測細胞凋亡。采用免疫組織化學法檢測Bcl-2和Bax基因表達情況。 結(jié)果： 1 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對AA

5、大鼠一般情況的影響：與模型組比較，MTX組、青蒿琥酯組、人參皂甙與青蒿琥酯配伍組均能改善大鼠的一般情況，給藥前后體重增加值有顯著性差異(P<0.05)；配伍組給藥前后體重增加值與空白對照組比較，差異無顯著性(P>0.05)。 2 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對AA大鼠足爪腫脹的抑制作用：給藥后，MTx組、人參皂甙組、青蒿琥酯組、人參皂甙與青蒿琥酯配伍組均能降低大鼠的足爪腫脹率，與模型組比較，差異顯著(P<0.05)；與各組比較，配伍

6、組作用最明顯(P<0.05)。 3 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對AA大鼠血清血管新生誘導因子的影響：模型組的VEGF、bFGF、 IL-1β、TNF-α水平高于空白對照組(P<0.05)，用藥后各組的細胞因子水平較模型組降低(P<0.05)，配伍組作用更優(yōu)于MTX組及單用人參皂甙和青蒿琥酯組(P<0.05)。 4 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對AA大鼠關(guān)節(jié)病理積分的影響：病理結(jié)果顯示：模型組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織內(nèi)有大量的炎性細胞

7、浸潤，有滑膜增生和軟骨破壞，有血管翳形成；治療后，滑膜組織內(nèi)炎細胞浸潤明顯減輕，滑膜增生減輕，軟骨破壞程度減弱。模型組與空白對照組比較，病理積分明顯增高(P<0.05)；各用藥組的病理積分與模型組比較均明顯下降(P<0.05)，而各用藥組之間以配伍組和MTX病理積分最低(P<0.05)，配伍組和MTX組之間差異無顯著性(P>0.05)。 5 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對AA大鼠滑膜組織VEGF和bFGF表達的影響：模型組滑膜組織中

8、VEGF、bFGF表達明顯高于空白對照組(P<0.05)，各用藥組的VEGF、bFGF與模型組比較均明顯下降(P<0.05)，其中以配伍組和MTX表達最低(P<0.05)，而配伍組和MTX組之間差異無顯著性(P>0.05)。 6 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對大鼠成纖維樣滑膜細胞增殖的抑制作用：一定濃度的青蒿琥酯與人參皂甙對體外的滑膜細胞增殖具有抑制作用，并且隨濃度、時間增加而作用增強，二者配伍較單用抑制作用更強(P<0.05)。

9、 7 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對大鼠成纖維樣滑膜細胞凋亡的影響：與空白對照組比較，人參皂甙與青蒿琥酯配伍(二藥濃度均為200μg/ml)在體外作用24小時可明顯促進大鼠細胞凋亡(P<0.05)，與MTX組比較無顯著性差異(P>0.05)。 8 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對大鼠成纖維樣滑膜細胞Bcl-2和Bax基因表達的影響：人參皂甙與青蒿琥酯配伍(二藥濃度均為200μg/ml)可下調(diào)Bcl-2基因表達，上調(diào)Bax基因表達(P

10、<0.05)，與MTX組比較無顯著性差異(P>0.05)。 9 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對大鼠成纖維樣滑膜細胞VEGF分泌的影響：與空白對照組比較，各用藥組滑膜細胞培養(yǎng)上清液中的VEGF水平降低(P<0.05)，人參皂甙與青蒿琥酯配伍組(二藥濃度均為200μg/ml)與人參皂甙組、青蒿琥酯組比較，有顯著性差異，而與MTX組比較無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1 中藥有效成分人參皂甙和青蒿琥酯均對大鼠AA具有顯著治