人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎血管新生及滑膜細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察中藥有效成分人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AdiuVant Anhritis，AA)的治療作用及其對(duì)AA大鼠血清和滑膜血管新生誘導(dǎo)因子-血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growch factor，VEGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)表達(dá)以及滑膜細(xì)胞凋亡的影響。 方法：1選擇體重150-180g的Wistar大鼠，雌雄各半，測(cè)

2、量雙側(cè)足爪容積后，于其右后足跖部常規(guī)消毒后皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(O.1ml/只)建立AA模型。2造模后第19天將成模大鼠隨機(jī)分為模型組、空白對(duì)照組、青蒿琥酯與人參皂甙配伍組(各80mg/kg.d)、人參皂甙組(80 mg/kg.d)、青蒿琥酯組(80 mg/kg.d)、甲氨喋呤組(1.6 mg/kg.d)，每組10只。當(dāng)日用容積測(cè)量?jī)x測(cè)量各組大鼠雙側(cè)足爪容積。治療各組連續(xù)灌胃給藥21天。給藥前后觀察大鼠的一般情況，并記錄體重。于給藥后第

3、22天再次測(cè)定各組大鼠足爪容積，觀察藥物對(duì)關(guān)節(jié)腫脹的抑制作用。3經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，離心，取血清，放射免疫分析法測(cè)定大鼠血清中白介素-1 β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor-α，TNF-α)含量，ELISA法測(cè)定VEGF、bFGF含量。4取血后立即取踝關(guān)節(jié)進(jìn)行固定、脫鈣、石蠟包埋、髓染色，光鏡觀察其病理變化，并計(jì)算關(guān)節(jié)病理積分。無(wú)菌取出踝關(guān)節(jié)處的滑膜組織，應(yīng)用免疫組織化

4、學(xué)法檢測(cè)滑膜組織中的VEGF、bFGF的表達(dá)。5取大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞株RSC-364，常規(guī)方法復(fù)蘇、培養(yǎng)。MTT比色分析法測(cè)定青蒿琥酯與人參皂甙及二者配伍對(duì)滑膜細(xì)胞增殖作用影響的量效關(guān)系和時(shí)效關(guān)系。收集滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液，ELISA法測(cè)定VEGF含量。脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Bcl-2和Bax基因表達(dá)情況。 結(jié)果： 1 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)AA

5、大鼠一般情況的影響：與模型組比較，MTX組、青蒿琥酯組、人參皂甙與青蒿琥酯配伍組均能改善大鼠的一般情況，給藥前后體重增加值有顯著性差異(P<0.05)；配伍組給藥前后體重增加值與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 2 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)AA大鼠足爪腫脹的抑制作用：給藥后，MTx組、人參皂甙組、青蒿琥酯組、人參皂甙與青蒿琥酯配伍組均能降低大鼠的足爪腫脹率，與模型組比較，差異顯著(P<0.05)；與各組比較，配伍

6、組作用最明顯(P<0.05)。 3 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)AA大鼠血清血管新生誘導(dǎo)因子的影響：模型組的VEGF、bFGF、 IL-1β、TNF-α水平高于空白對(duì)照組(P<0.05)，用藥后各組的細(xì)胞因子水平較模型組降低(P<0.05)，配伍組作用更優(yōu)于MTX組及單用人參皂甙和青蒿琥酯組(P<0.05)。 4 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)病理積分的影響：病理結(jié)果顯示：模型組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織內(nèi)有大量的炎性細(xì)胞

7、浸潤(rùn)，有滑膜增生和軟骨破壞，有血管翳形成；治療后，滑膜組織內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，滑膜增生減輕，軟骨破壞程度減弱。模型組與空白對(duì)照組比較，病理積分明顯增高(P<0.05)；各用藥組的病理積分與模型組比較均明顯下降(P<0.05)，而各用藥組之間以配伍組和MTX病理積分最低(P<0.05)，配伍組和MTX組之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 5 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)AA大鼠滑膜組織VEGF和bFGF表達(dá)的影響：模型組滑膜組織中

8、VEGF、bFGF表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，各用藥組的VEGF、bFGF與模型組比較均明顯下降(P<0.05)，其中以配伍組和MTX表達(dá)最低(P<0.05)，而配伍組和MTX組之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 6 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖的抑制作用：一定濃度的青蒿琥酯與人參皂甙對(duì)體外的滑膜細(xì)胞增殖具有抑制作用，并且隨濃度、時(shí)間增加而作用增強(qiáng)，二者配伍較單用抑制作用更強(qiáng)(P<0.05)。

9、 7 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞凋亡的影響：與空白對(duì)照組比較，人參皂甙與青蒿琥酯配伍(二藥濃度均為200μg/ml)在體外作用24小時(shí)可明顯促進(jìn)大鼠細(xì)胞凋亡(P<0.05)，與MTX組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 8 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞Bcl-2和Bax基因表達(dá)的影響：人參皂甙與青蒿琥酯配伍(二藥濃度均為200μg/ml)可下調(diào)Bcl-2基因表達(dá)，上調(diào)Bax基因表達(dá)(P

10、<0.05)，與MTX組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 9 人參皂甙與青蒿琥酯配伍對(duì)大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞VEGF分泌的影響：與空白對(duì)照組比較，各用藥組滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的VEGF水平降低(P<0.05)，人參皂甙與青蒿琥酯配伍組(二藥濃度均為200μg/ml)與人參皂甙組、青蒿琥酯組比較，有顯著性差異，而與MTX組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1 中藥有效成分人參皂甙和青蒿琥酯均對(duì)大鼠AA具有顯著治