痹痛靈顆粒對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)滑膜及肺部病變血管新生影響的研究.pdf

1、目的:從中醫(yī)整體觀(guān)念出發(fā),按照中醫(yī)痹癥皮痹不已,復(fù)感于邪,內(nèi)舍于肺,肢體痹與肺痹相關(guān)之理論,觀(guān)察痹痛靈顆粒對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)滑膜與肺部病變血管新生的影響作用,為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:1.在目前公認(rèn)的Ⅱ型膠原關(guān)節(jié)炎(CIA)模型基礎(chǔ)上,使用博來(lái)霉素致間質(zhì)性肺疾病(ILD),探索改進(jìn)建立大鼠Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎伴博來(lái)霉素致間質(zhì)性肺疾病復(fù)合模型(CIA-ILD)。
　　 2.肉眼觀(guān)察各組大鼠的整體狀態(tài),活動(dòng)行為

2、,關(guān)節(jié)腫脹程度,呼吸狀況。
　　 3.參照文獻(xiàn)方法評(píng)定關(guān)節(jié)炎分?jǐn)?shù)(AI)。
　　 4.用排水法測(cè)量雙后足部體積變化。
　　 5.常規(guī)HE染色,觀(guān)察各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜和肺組織病理變化,并進(jìn)行評(píng)分。
　　 6.采用FⅧ因子(factorⅧrelatedantigen)抗體免疫組化標(biāo)記,觀(guān)察各組關(guān)節(jié)滑膜和肺組織微血管密度(MVD)變化。
　　 7.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-TimePCR,RT-P

3、CR)檢測(cè)方法,觀(guān)察痹痛靈顆粒對(duì)各組關(guān)節(jié)滑膜組織和肺組織IL-17mRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA、VEGFmRNA基因表達(dá)的影響。
　　 8.資料數(shù)據(jù)以-x±s表示,應(yīng)用2-△△Ct法分析real-timePCR數(shù)據(jù),當(dāng)目的基因表達(dá)≥2倍,認(rèn)為該基因表達(dá)增高,若≤0.5倍認(rèn)為基因表達(dá)降低。其余數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,各組間比較采用方差分析,以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1.C

4、IA-ILD實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠整體狀態(tài)飲水、進(jìn)食量、皮毛光澤、活動(dòng)行為較正常組減少:關(guān)節(jié)腫脹、呼吸較正常組加快。模型組大鼠雙足部體積比較與關(guān)節(jié)炎評(píng)分造模第21天較造模第7天有顯著增加(P＜0.05)。模型組造模第7天滑膜間皮增厚,炎性浸潤(rùn)細(xì)胞;造模14天滑膜間皮增厚,炎性浸潤(rùn)細(xì)胞加重;造模第21天滑膜間皮增厚,炎性浸潤(rùn)細(xì)胞更為加重。關(guān)節(jié)滑膜病變程度病理評(píng)分造模第21天較造模第7天有顯著增加(P＜0.05)。模型組于造模第七天肺泡壁出現(xiàn)輕中度

5、增厚,間質(zhì)淋巴細(xì)胞漿細(xì)胞炎性細(xì)胞浸潤(rùn),局部出血,造模第14天肺泡壁重度增厚,間質(zhì)淋巴細(xì)胞漿細(xì)胞浸潤(rùn),造模第21天時(shí)肺組織可見(jiàn)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)呈斑片狀分布,在支氣管周?chē)∽冇葹槊黠@。肺泡間隔增寬充血,局部肺泡上皮細(xì)胞增生,部分肺泡內(nèi)可見(jiàn)巨噬細(xì)胞簇集成團(tuán),纖維母細(xì)胞及纖維細(xì)胞增生,肺泡炎肺纖維化程度比較造模第21天較造模第7天有顯著增加(P＜0.05)。組織病理學(xué)第7天,第14天,第21天觀(guān)察發(fā)現(xiàn),關(guān)節(jié)滑膜和肺部病變出現(xiàn)和進(jìn)展,造模成功。

6、r>　　 2.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠關(guān)節(jié)炎腫脹明顯,各給藥組關(guān)節(jié)腫脹度都有不同程度減輕,關(guān)節(jié)炎評(píng)分均低于模型組,以痹痛靈高、中劑量組和雷公藤多苷組效果較為顯著(P＜0.05)。模型組關(guān)節(jié)滑膜病理組織評(píng)分增高,滑膜組織滑膜細(xì)胞增生,多層以上,排列疏散、紊亂,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、聚集。痹痛靈高劑量組、痹痛靈中劑量組,雷公藤多苷組病理改善明顯,痹痛靈低劑量組有所改善。模型組肺組織可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡間隔增寬充血可見(jiàn)肺泡內(nèi)出血,出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)。痹痛靈高劑量

7、組、痹痛靈中劑量組,雷公藤多苷組病理改善明顯(P＜0.05),痹痛靈低劑量組有所改善。
　　 3.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織和肺組織MVD的數(shù)量相對(duì)正常組增高,痹痛靈高中低劑量組及雷公藤多苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織和肺組織MVD的數(shù)量較模型組減少(P＜0.05)。
　　 4.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M比正常組IL-17mRNA在關(guān)節(jié)滑膜中表達(dá)≥2倍,基因表達(dá)在大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織和肺組織增高。痹痛靈高中劑量組比模型組IL-17mRNA在關(guān)節(jié)滑膜中

8、表達(dá)≤1/2倍,基因表達(dá)降低。雷公藤多苷組比模型組IL-17mRNA在關(guān)節(jié)滑膜中表達(dá)倍≤1/2,基因表達(dá)降低。模型組大鼠肺組織中IL-17mRNA表達(dá)比正常組≥2倍,基因表達(dá)增高。痹痛靈高劑量組大鼠肺組織中IL-17mRNA表達(dá)比模型組≤1/2倍,基因表達(dá)降低。雷公藤多苷組大鼠肺組織中IL-17mRNA表達(dá)比模型組≤1/2倍,基因表達(dá)降低。
　　 5.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織IL-1βmRNA中表達(dá)比正常組≥2倍,基因表達(dá)增高

9、。痹痛靈高劑量組及雷公藤多苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織IL-1βmRNA表達(dá)比模型組≤1/2倍,基因表達(dá)下調(diào)。模型組大鼠肺組織IL-1βmRMA表達(dá)比正常組≥2倍,基因表達(dá)增高,痹痛靈高劑量組及雷公藤多苷組大鼠肺組織IL-1βmRNA表達(dá)比模型組≤1/2倍,基因表達(dá)下調(diào)。
　　 6.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織和肺組織TNF-αmRNA表達(dá)比正常組≥2倍,基因表達(dá)增高。痹痛靈高中劑量組及雷公藤多苷組使大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織TNF-αmRNA表達(dá)

10、比模型組≤1/2倍,基因表達(dá)下調(diào)。模型組大鼠肺組織TNF-αmRNA基因表達(dá)量相對(duì)正常組增高,痹痛靈高中劑量組及雷公藤多苷組大鼠肺組織TNF-αmRNA比模型組≤1/2倍,基因表達(dá)下調(diào)。
　　 7.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織VEGFmRNA表達(dá)相對(duì)正常組≥2倍,基因表達(dá)增高。痹痛靈高劑量組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織VEGFmRNA比模型組≤1/2倍,基因表達(dá)下調(diào)。模型組大鼠肺組織VEGFmRNA相對(duì)正常組≥2倍,基因表達(dá)增高,痹痛靈高中劑

11、量組肺組織VEGFmRNA較模型組≤1/2倍,基因表達(dá)下調(diào)。雷公藤多苷組大鼠肺組織中VEGFmRNA較模型組≤1/2倍,基因表達(dá)降低。
　　 結(jié)論:1.為探討痹痛靈顆粒對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)和肺部病變的影響,首次進(jìn)行了CIA-ILD的建模工作。組織病理學(xué)第7天,第14天,第21天關(guān)節(jié)滑膜和肺部病變出現(xiàn)和進(jìn)展。
　　 2.痹痛靈顆粒對(duì)痹癥類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ虲IA-ILD大鼠關(guān)節(jié)滑膜和肺組織兩個(gè)部位炎性病理變化有著抑制作用,高