TRAF1在乳腺癌不同轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系中的表達(dá)及其與TRAF2結(jié)合的改變.pdf

1、目的：腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子(TRAF)是一類重要的胞漿銜接蛋白，它們參與多個(gè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，引發(fā)相應(yīng)的基因活化，其中最主要的是引起NF-кB和JNK的活化，從而調(diào)節(jié)正常和腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、凋亡并誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞出芽等。迄今為止共發(fā)現(xiàn)7種TRAFs家族成員，其中以TRAF1最為特殊。國(guó)內(nèi)外關(guān)于TRAF1在TNFR信號(hào)通路中所發(fā)揮的作用及其作用方式存在不同看法：有些研究認(rèn)為TRAF1在TNFR家族誘導(dǎo)的NF-кB激活中作為負(fù)性調(diào)控子

2、存在，而又有些研究認(rèn)為，在細(xì)胞系中外源性轉(zhuǎn)染TRAF1使之過(guò)表達(dá)可促進(jìn)NF-кB的激活。在TRAFs成員中TRAF1與TRAF2的關(guān)系最為密切，二者可形成二聚體共同參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。目前關(guān)于TRAF1在乳腺癌中表達(dá)及意義的研究尚少。 本實(shí)驗(yàn)主要應(yīng)用免疫組化S-P法，Westem Blot方法研究TRAF1在正常乳腺上皮細(xì)胞系以及乳腺癌不同轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系中的表達(dá)和意義，并且運(yùn)用免疫共沉淀的方法研究TRAF1與TRAF2在上述細(xì)胞系中結(jié)合

3、量的改變及其意義。 材料與方法: 1、材料 正常乳腺上皮細(xì)胞系MCF-10A，人雌激素受體依賴性乳腺癌細(xì)胞系MCF-7(低轉(zhuǎn)移)，人雌激素受體非依賴性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231(中轉(zhuǎn)移)和MDA-MB-435s(高轉(zhuǎn)移)。 2、方法 (1)應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)TRAF1在培養(yǎng)的正常乳腺上皮細(xì)胞系MCF-10A，乳腺癌細(xì)胞系MCF-7(低轉(zhuǎn)移)、MDA-MB-231(中轉(zhuǎn)移)、MDA-MB-4

4、35s(高轉(zhuǎn)移)中的表達(dá)。 (2)應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)TRAF1在培養(yǎng)的正常乳腺上皮細(xì)胞系MCF-10A，乳腺癌細(xì)胞系MCF-7(低轉(zhuǎn)移)、MDA-MB-231(中轉(zhuǎn)移)、MDA-MB-435s(高轉(zhuǎn)移)中的表達(dá)。 (3)應(yīng)用免疫共沉淀方法檢測(cè)TRAF1和TRAF2在正常乳腺上皮細(xì)胞系MCF-10A，乳腺癌細(xì)胞系MCF-7(低轉(zhuǎn)移)、MDA-MB-435s(高轉(zhuǎn)移)中的結(jié)合情況。 (4)應(yīng)用SPS

5、S12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，對(duì)TRAF1在各細(xì)胞系中的表達(dá)量以及TRAF1與TRAF2在各細(xì)胞系中的結(jié)合量進(jìn)行方差分析及其兩兩比較，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1、TRAF1在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)顯著高于正常乳腺上皮細(xì)胞系，并且隨著乳腺癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)移性的增加，TRAF1的表達(dá)量遞增。 2、TRAF1與TRAF2在正常乳腺上皮細(xì)胞系及各乳腺癌細(xì)胞系中均結(jié)合。 3、TRAF