免疫細胞因子基因及相關miRNAs在肉雞急性冷、熱應激中的表達調(diào)控研究.pdf

1、高密度集約化的飼養(yǎng)模式極易使肉雞產(chǎn)生熱應激。但是，濕簾以及降溫措施不當使用又極易產(chǎn)生冷應激。急性冷、熱應激的發(fā)生首先破壞的是家禽機體的免疫機能，嚴重影響肉雞的商品化生產(chǎn)，造成巨大的經(jīng)濟損失。采用現(xiàn)代生物檢測技術研究急性冷熱應激條件下肉雞免疫細胞因子基因在各免疫器官中的表達規(guī)律，揭示micRNAs與其靶基因?qū)毙詰さ恼{(diào)控機理，為培育抗寒抗熱肉雞品種提供理論依據(jù)，具有重大的實際生產(chǎn)意義。
　　本實驗以45只28日齡體重及健康狀況相近

2、的羅斯308肉雞為研究對象，分為正常對照組、熱應激組和冷應激組分別模擬實際生產(chǎn)產(chǎn)生急性熱應激反應和冷應激反應。采用實時熒光定量PCR對8個免疫細胞因子基因(IL-1、IL-1α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12α、IL-12β、INF-γ)和4個熱應激蛋白基因(Hsp60、Hsp70、Hsp90和Hsp110)在脾臟、胸腺、法氏囊、肝臟、心臟等組織中的表達量進行測定分析。并采用miRNA測序技術對脾臟組織的miRNAs進行檢測，

3、篩選差異表達miRNAs，并預測其靶基因。進一步從細胞水平和分子水平對差異表達miRNAs與細胞因子基因互作進行驗證，揭示差異miRNAs及其靶基因?qū)毙岳錈釕さ恼{(diào)控機理。研究得到以下結(jié)果:
　　1.在脾臟組織中，只有急性熱應激條件下IL-1α和IL-1兩個基因表達影響顯著升高(P＜0.05);在胸腺組織中，除IL-12α表達在各處理組無顯著變化，其余7個細胞因子表達量均顯著下降;在法氏囊組織中，各處理組均未檢測到IL-12α的

4、表達，急性熱應激條件下其他7個細胞因子基因表達均顯著下降(P＜0.05)。
　　2.在心臟組織與肝臟組織中，急性熱應激條件下HSP70與HSP110表達極顯著升高(P＜0.01)。
　　3.對脾臟組織miRNA測序結(jié)果揭示，根據(jù)|log2Fold|＞1和p value＜0.05原則，正常組和熱應激組之間篩選出12個差異表達miRNAs，在正常組和冷應激組之間發(fā)現(xiàn)1個差異表達miRNAs，在冷應激和熱應激組之間篩選出20個差異

5、表達miRNAs。通過對所有差異表達miRNAs把基因的預測，篩選出4個差異表達miRNAs的靶基因為免疫細胞因子基因。
　　4.通過WEGO和GO Pathway通路富集分析，急性熱應激條件下差異表達miRNAs顯著富集在細胞因子互作的通路中。
　　5.雙熒光素酶報告結(jié)果表明，gga-miR-34a-5P和gga-miR-449c-5P對IL-2和IL-12α的表達具有負調(diào)控的作用。
　　綜上所述，本研究結(jié)果表明，急