利用體外細(xì)胞共培養(yǎng)模型研究子宮內(nèi)膜異位癥的血管生成.pdf

1、目的：
　　 1、建立子宮內(nèi)膜異位癥子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(ESC)、臍帶靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)體外共培養(yǎng)模型。
　　 2、應(yīng)用該模型,觀察內(nèi)異癥患者(研究組em)及非內(nèi)異癥患者(對(duì)照組con)ESC與HUVEC共培養(yǎng)后,細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移的微觀行為,比較細(xì)胞共培養(yǎng)后行為的差異。
　　 3、用建立的模型探討β雌二醇(E)、孕酮(PO)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)對(duì)ESC與HUVEC共培養(yǎng)后HUVEC細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的影響

2、。
　　 方法：
　　 1、取組織分離培養(yǎng)原代ESC和HUVEC2、設(shè)計(jì)制備二甲基硅氧烷(PDMS)印章3、利用雙孔道同時(shí)接種同一種細(xì)胞,進(jìn)行愈合實(shí)驗(yàn)分別觀察ESC、HUVEC生長速度的差異。
　　 4、em及con組的ESC和HUVEC共培養(yǎng)并免疫熒光標(biāo)記,24小時(shí)拍照,比較兩組共培養(yǎng)體系中HUVEC生長差異。
　　 5、用含有不同濃度E、PO、VEGF的培養(yǎng)基培養(yǎng)共培養(yǎng)體系,并免疫熒光標(biāo)記,24小時(shí)拍

3、照,比較兩組共培養(yǎng)體系中HUVEC生長差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、當(dāng)孔道寬400μm時(shí),孔道間距800μm,ESC密度5×106/l、HUVEC密度5×106/l時(shí)在孔道內(nèi)生長良好,2小時(shí)可貼壁牢固,揭膜后圖案化好。
　　 2、模型設(shè)計(jì)當(dāng)愈合孔道寬度200μm時(shí),19小時(shí)HUVEC完全愈合；ESC未完全愈合(em及con無明顯差異)；
　　 3、ESC與HUVEC共培養(yǎng)后,HUVEC條帶靠近ESC一側(cè)

4、細(xì)胞密度高。
　　 4、ESC-HUVEC共培養(yǎng)體系中,較HUVEC單獨(dú)培養(yǎng),HUVEC生長速度快(P<0.05)；ESCem-HUVEC共培養(yǎng)體系中,較ESCcon-HUVEC共培養(yǎng)體系,HUVEC生長速度快(P<0.05)。
　　 5、ESC-HUVEC共培養(yǎng)體系中,1)β雌二醇濃度為2.0nmol/l,HUVEC生長加快(P<0.05)；添加雌激素各組間,濃度與HUVEC生長成正相關(guān)(P<0.05)；
　　

5、 2)孕酮濃度為30nmol/l,70nmol/l,HJUVEC生長減慢(P<0.05)；添加孕激素各組間,濃度與HUVEC生長成負(fù)相關(guān)(P<0.05)；
　　 3)VEGF750pg/ml,HUVEC生長加快(P<0.05)；添加VEGF各組間,濃度與HUVEC生長成正相關(guān)(P<0.05)；
　　 4)β雌二醇濃度為0.2nmol/l,有抑制HUVEC生長現(xiàn)象(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、