轉(zhuǎn)染軟骨調(diào)節(jié)素-1的脂肪干細(xì)胞在兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)中的作用.pdf

1、目的:研究轉(zhuǎn)染軟骨調(diào)節(jié)素-1的脂肪干細(xì)胞在兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)中的作用。
　　方法:以慢病毒作為載體,將軟骨調(diào)節(jié)素-1基因轉(zhuǎn)染入脂肪源性干細(xì)胞,同時(shí)設(shè)立沒有攜帶基因的空載體慢病毒轉(zhuǎn)染的脂肪干細(xì)胞為對照組,兩組脂肪干細(xì)胞經(jīng)GFP陽性細(xì)胞通過流式細(xì)胞術(shù)分離,進(jìn)行了多向分化的測定,包括成骨的茜素紅染色和成脂的油紅O染色。同時(shí)采用免疫印跡和實(shí)時(shí)PCR測定研究轉(zhuǎn)染軟骨調(diào)節(jié)素-1在細(xì)胞表達(dá)。將沒有攜帶基因的空載體慢病毒轉(zhuǎn)染的脂肪源性干細(xì)胞[l

2、entivirus-empty vetor(對照組)]和攜帶軟骨調(diào)節(jié)素-1的慢病毒轉(zhuǎn)染的脂肪源性干細(xì)胞[lentivirus-ChM-1(ChM-1組)]分別接種在硅藻鹽膠體復(fù)合支架上體外培養(yǎng)24小時(shí)。18只新西蘭白兔隨機(jī)分為3組,骨缺損組,對照組和CHM-1組。每組6只,建立關(guān)節(jié)軟骨缺損模型。將體外培養(yǎng)24小時(shí)后的的轉(zhuǎn)染軟骨調(diào)節(jié)素-1的脂肪源性干細(xì)胞的支架復(fù)合物移植到兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處,縫合傷口。對照組采取相同的辦法植入支架復(fù)合物,缺

3、損組未作處理(空白對照組)。術(shù)后常規(guī)使用抗生素,為限制動物活動。12周之后將兔處死取材,采用大體觀察、II型膠原甲苯胺藍(lán)染色和Wakitani得分對軟骨的形態(tài)學(xué)及修復(fù)效果進(jìn)行評價(jià)。
　　結(jié)果:免疫組化和實(shí)時(shí)PCR顯示,CHM-1組持續(xù)表達(dá)軟骨調(diào)節(jié)素。證明,CHM-1基因已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入脂肪干細(xì)胞。在軟骨組織修復(fù)的程度上ChM-1組與對照組、缺損組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Wakitani評分)。在軟骨缺陷修復(fù)上,組織學(xué)觀察顯示實(shí)驗(yàn)組手術(shù)后第1