DOX和CA4P共載mPEG-PLA聚合物囊泡的制備及其腫瘤抑制作用研究.pdf

1、阿霉素(DOX)是一種強效抗腫瘤藥物，但因其缺乏腫瘤靶向性、毒副作用大，且易產(chǎn)生多藥耐藥(MDR)，臨床應(yīng)用受到很大限制。康普瑞丁A4磷酸酯(CA4P)在1/10最大耐受量(MTD)的劑量下就可以選擇性地產(chǎn)生抗腫瘤血管作用，但存在體內(nèi)消除快、抗腫瘤作用不徹底的問題。鑒于此，我們構(gòu)建了聚乙二醇單甲醚-聚乳酸(mPEG-PLA)囊泡，共同包載DOX與CA4P，以期通過增強滲透與滯留(EPR)效應(yīng)使DOX與CA4P同時被動靶向于腫瘤組織，降低

2、藥物毒副作用，并著重考察DOX與CA4P共載后對提高腫瘤抑制率及逆轉(zhuǎn)耐藥的影響及作用機制。
　　課題研究工作分為以下三部分:
　　第一部分，采用開環(huán)聚合反應(yīng)合成了不同親/疏水鏈段比例的兩親性嵌段共聚物聚乙二醇單甲醚-聚乳酸(mPEG-PLA)，并優(yōu)選出具有合適fEO、能自組裝形成囊泡，且具有較好載藥能力的載體材料mPEG114-PLA162。采用溶劑蒸發(fā)法制備了空白聚合物囊泡及DOX和CA4P共載聚合物囊泡(Ps-DOX-C

3、A4P)，并對其形態(tài)、粒徑、包封率及釋放行為進行了考察。結(jié)果顯示，空白自組裝體外觀呈類球形，形態(tài)規(guī)整，粒徑約為50nm，具有較大的親水內(nèi)核，外周由約10nm的疏水層環(huán)繞，顯示出典型的囊泡結(jié)構(gòu)。Ps-DOX-CA4P具有與空白囊泡類似的大小及形態(tài)，能夠共載DOX和CA4P，DOX的包封率大于90％，CA4P的包封率大于50％。藥物釋放的實驗結(jié)果表明，DOX的釋放速度略慢于CA4P。
　　第二部分，以KB細胞為模型，考察了Ps-DOX

4、-CA4P對腫瘤抑制的協(xié)同增效作用。MTT實驗結(jié)果顯示，空白聚合物囊泡無明顯的細胞毒性，而Ps-DOX-CA4P與CA4P單載囊泡(Ps-CA4P)或DOX單載囊泡(Ps-DOX)相比，細胞毒性明顯增加。建立裸鼠KB細胞移植瘤模型，考察聚合物囊泡的體內(nèi)分布及藥效。結(jié)果顯示，聚合物囊泡所載的DOX在腫瘤組織的分布明顯高于游離藥(p＜0.05)，說明聚合物囊泡能夠提高DOX在腫瘤組織的蓄積。Ps-CA4P能快速抑制腫瘤的生長，但作用短暫，P

5、s-DOX起效慢而作用持久，兩者共載的囊泡Ps-DOX-CA4P(1∶10)既能迅速起效，又能持續(xù)維持抗腫瘤的藥效，抑瘤作用顯著提高。CD31和Ki67免疫組化實驗也顯示，DOX與CA4P共載后，不僅能迅速破壞腫瘤血管，而且能持續(xù)抑制腫瘤細胞的增殖，產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用。
　　第三部分，以阿霉素耐藥MCF-7/ADR細胞為模型，通過細胞毒實驗、細胞凋亡實驗、DOX的細胞攝取、ATP酶的活性測定、細胞內(nèi)ATP測定、胞內(nèi)ROS測定及體外

6、腫瘤球等實驗研究，探討了Ps-DOX-CA4P逆轉(zhuǎn)耐藥的作用機制。結(jié)果表明，Ps-DOX-CA4P能提高DOX對MCF-7/ADR細胞的細胞毒性和細胞凋亡率、促進MCF-7/ADR細胞對DOX的攝取、激活A(yù)TP酶的活性、降低細胞內(nèi)ATP、提高細胞內(nèi)的ROS，最終抑制了藥物外排泵P-gp的功能而逆轉(zhuǎn)耐藥。同時，通過體外腫瘤球?qū)嶒灠l(fā)現(xiàn)，Ps-DOX-CA4P能明顯促進DOX滲透進入腫瘤球并且抑制腫瘤球的生長，提示Ps-DOX-CA4P有望在