耐藥性白假絲酵母菌主動外排泵基因過度表達與轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制的研究.pdf

1、目的研究白假絲酵母菌對唑類藥物的耐藥性與主動外排泵基因過度表達的關系，并初步探討主動外排泵基因過度表達的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。 方法①微量稀釋法測定4種抗真菌藥物對40株臨床分離的白假絲酵母菌的最低抑菌濃度(MIC)；②檢測羅丹明6G在敏感和對氟康唑耐藥的白假絲酵母菌中的外排情況，篩選出羅丹明6G外排明顯增加的耐藥菌株；③RT-PCR方法檢測主動外排泵基因CDR1和CDR2的相對表達水平；④EMSA法檢測與CDRl基因表達上調(diào)有關的

2、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子與藥物反應元件(drug response element，DRE)的結(jié)合活性。 結(jié)果①40株臨床分離菌中，所有菌株對兩性霉素B均敏感；對氟康唑耐藥的有11株(MIC>32μg／ml)，有2株對氟康唑產(chǎn)生藥物依賴，其MIC值為：84μg/ml)；對咪康唑耐藥的有6株(MIC>4μg/ml)。②11株耐氟康唑的白假絲酵母菌中，有5株對羅丹明6G的外排明顯增加，與敏

3、感株比較，有顯著差異性(P<0.01)。而在這些菌株中，CDRl和CDR2基因的相對表達水平與敏感株比較，也顯著增高(P<0.01)。③在白假絲酵母菌中，存在著一種可以與DRE元件結(jié)合的核轉(zhuǎn)錄因子；在5株CDRl基因過度表達的白假絲酵母菌中，有3株其DRE-核轉(zhuǎn)錄因子復合物的結(jié)合活性較敏感株增高。 結(jié)論①白假絲酵母菌對氟康唑產(chǎn)生耐藥性與主動外排泵基因過度表達機制相關；②測定白假絲酵母菌中羅丹明6G的外排情況，是篩選主動外排泵基因