順鉑誘導人胃癌細胞株BGC-823耐藥過程中hMLH1、hMSH2蛋白表達的變化.pdf

1、該研究以自建的人胃癌順鉑耐藥細胞株BGC-823/cDDP為載體,檢測誘導后細胞株的生物學行為變化及耐藥性的產(chǎn)生情況和誘導前后腫瘤細胞肺耐藥蛋白(lung resistance protein,LRP)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π(glutathione-S-transferase-π,GST-π)及錯配修復基因hMLH1、hMSH2的表達,初步探討耐藥性產(chǎn)生與錯配修復基因產(chǎn)物表達的關(guān)系,以期證明細胞錯配修復基因功能喪失是腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性

2、的機制之一,希望能為逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性提供一些幫助.方法:1.BGC-823/cDDP耐藥細胞株的建立及耐藥前后生物學行為的觀察.采用逐步遞增順鉑(Cisplatin,cDDP)濃度、間歇作用體外誘導法,建立人胃癌順鉑耐藥細胞株BGC-823/cDDP;MTT法檢測新建耐藥株的耐藥指數(shù)及交叉耐藥性;倒置顯微鏡下觀察親本細胞株和耐藥細胞株在藥物作用后的細胞形態(tài)學差異;通過細胞群體倍增時間、細胞周期分布及染色體核型分析等方法觀察耐藥前后細胞的生

3、物學特征變化,以確定耐藥株的建立.2.檢測與多藥耐藥相關(guān)的蛋白及錯配修復蛋白.免疫細胞化學法檢測多藥耐藥相關(guān)的蛋白LRP、GST-π及錯配修復蛋白hMLH1、hMSH2的表達;蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測錯配修復蛋白hMLH1、hMSH2的表達,比較細胞株耐藥產(chǎn)生前后上述蛋白表達的變化,探討這些蛋白在人胃癌細胞株BGC-823對順鉑產(chǎn)生耐受過程中的作用.結(jié)論:1.利用逐步遞增藥物濃度、間歇作用體外誘導法從人胃癌細胞株BGC-823誘導出耐藥細胞

4、株BGC-823/cDDP,耐藥指數(shù)為3.93.耐藥株BGC-823/cDDP細胞的生物學特性與親本株BGC-823細胞相比存在差異,細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)有差異且增殖減慢、染色體數(shù)目的分布離散.2.BGC-823/cDDP細胞LRP及GST-π的表達均強于BGC-823細胞,說明順鉑誘導后的BGC-823/cDDP細胞已產(chǎn)生了耐藥性.3.與BGC-823細胞相比耐藥株BGC-823/cDDP細胞錯配修復基因hMLH1表達無顯著性差異,但hMS