大蒜阿霍烯的純化和酶解轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、大蒜阿霍烯是一類具有強(qiáng)效抗血栓功能并且沒(méi)有大蒜強(qiáng)烈辣臭味的天然穩(wěn)定的活性物質(zhì)，為開(kāi)發(fā)生產(chǎn)高附加值的大蒜保健制品，給大蒜深加工綜合利用提供參考依據(jù)，本文研究了以下內(nèi)容： 初步建立了從鮮蒜中提取分離阿霍烯類活性物質(zhì)的方法：(1)經(jīng)低溫充分粉碎得到的蒜漿，甲醇浸提后，分別用無(wú)水乙醚、環(huán)已烷、二氯甲烷等進(jìn)行多級(jí)萃取，得到了具有大蒜特有臭味的，深黃綠色油狀大蒜提取物；(2)對(duì)此提取物經(jīng)160～200目硅膠常壓柱層析分離，得到薄層層析(TL

2、C)Rf值在0.2～0.5范圍內(nèi)的流分；此流分再經(jīng)真空快速柱層析，分離到薄層層析(TLC)Rf值在0.36左右的流分；將該流分用制備薄層層析進(jìn)一步純化，得到兩條譜帶，分別為樣品Ⅰ、Ⅱ，經(jīng)高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)，純度均達(dá)到90％以上，液譜-質(zhì)譜(LC-MS)聯(lián)用分析定性：樣品Ⅰ為阿霍烯類物質(zhì)，其物理性狀為：無(wú)色油狀液體，無(wú)明顯大蒜辣臭味。 研究了阿霍烯類物質(zhì)的分析檢測(cè)方法，建立了薄層層析(TLC)法和高效液相色譜(HPLC)

3、法的分析條件。(1)TLC分析條件：硅膠GF254薄層預(yù)制板(25mm×100mm)，展開(kāi)劑：乙酸乙酯，紫外熒光顯色；(2)HPLC分析條件：色譜柱：Diamonsil(R)C-18柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱溫28℃C；流動(dòng)相：含0.1％(V/V)甲酸的水溶液(A溶液)和甲醇(B溶液)，A/B=35∶65(V/V)；二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。 探討了酶解轉(zhuǎn)化過(guò)程對(duì)阿霍烯類提取率的影響：考察了大蒜破碎后

4、其內(nèi)源酶作用過(guò)程中的酶解時(shí)間、酶解體系pH值和酶解溫度等主要影響因素。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了二次旋轉(zhuǎn)正交組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)，結(jié)果表明：酶解時(shí)間是影響大蒜中阿霍烯類提取率的顯著因素；阿霍烯類提取率Y與酶解時(shí)間(X1)，酶解體系pH值(X2)，酶解溫度(X3)的非線性關(guān)系顯著，得到回歸方程：Y=38.06-1.06X1-4.14×X1×X1+2.31×X1×X2-1.52×X2×X2-2.15×X3×X3，能較好地?cái)M合在自變量變化范圍內(nèi)的試驗(yàn)