蘋果α-法尼烯合成酶基因轉(zhuǎn)化番茄研究.pdf

1、α-法尼烯是一種存在于生物體中的倍半萜類物質(zhì)，已知與植物的抗冷性、昆蟲的誘導(dǎo)及冷藏蘋果和梨果實(shí)重大生理病害一虎皮病的發(fā)生有關(guān)，是蘋果果實(shí)中重要的香氣成分之一。α-法尼烯的生物合成是通過(guò)類異戊二烯途徑中的甲羥戊酸途徑，α-法尼烯合成酶是調(diào)控α-法尼烯合成的關(guān)鍵酶，催化FPP轉(zhuǎn)變?yōu)棣?法尼烯。
　　 本實(shí)驗(yàn)根據(jù)Genbank中注冊(cè)的α-法尼烯合成酶基因全長(zhǎng)序列設(shè)計(jì)特定引物，利用RT-PCR的方法擴(kuò)增青香蕉蘋果α-法尼烯合成酶基因的全

2、長(zhǎng)，構(gòu)建表達(dá)載體，優(yōu)化番茄（中蔬6號(hào)）的再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化番茄，初步獲得轉(zhuǎn)基因植株，并研究了生理特性。
　　 主要結(jié)果如下：
　　 1、構(gòu)建了pBI-AFS正義表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化番茄，得到轉(zhuǎn)AFS基因的番茄。
　　 2、以番茄子葉為材料，優(yōu)化了番茄的再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系，最適宜番茄子葉再生的培養(yǎng)基為MS+ZT2.0mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂6.0g/L，生根培養(yǎng)基為

3、MS+IAA0.5 mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂6.0g/L，確定在再生過(guò)程中Kan選擇壓為50mg/L；抑菌過(guò)程中頭孢霉素100mg/L為宜。
　　 3、通過(guò)克隆青香蕉蘋果的α-法尼烯合成酶基因（AFS）片段，構(gòu)建pEASYE1-AFS-原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，制備抗體，進(jìn)行了Western雜交分析，顯示該基因在番茄中成功表達(dá)。
　　 4、高溫處理后轉(zhuǎn)AFS基因番茄比野生型番茄具有較高的耐熱性，高溫脅迫條件下