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文檔簡介
1、目的:探索大蒜素對膀胱腫瘤的治療作用,揭示其與凋亡之間的關(guān)系,進一步發(fā)現(xiàn)其在體內(nèi)抗腫瘤可能的作用機制,為膀胱腫瘤的治療尋找一個新的藥物。 方法: 1.大鼠膀胱腫瘤模型的建立:用N-甲基亞硝基脲膀胱灌注法建立荷瘤大鼠模型。 2.將60只荷瘤大鼠隨機分成4組,每組15只,分別為生理鹽水組,順鉑組,低濃度大蒜素組,高濃度大蒜素組。給藥途徑:腹腔注射。隔日一次,共7次。期間觀察大鼠的生活狀態(tài)及體重變化,注射完畢后處死大鼠
2、,檢測膀胱總重量的變化,HE染色觀察各組大鼠膀胱腫瘤組織病理學(xué)變化。 3.TUNEL方法檢測各組膀胱腫瘤組織的凋亡情況,RT-PCR和免疫組化方法檢測各組大鼠膀胱腫瘤組織caspase-3 mRNA和蛋白的表達情況,揭示大蒜素誘導(dǎo)膀胱腫瘤凋亡的可能機制。 結(jié)果: 1.N-甲基亞硝基脲(MUN)膀胱灌注誘導(dǎo)的大鼠膀胱腫瘤組織病理學(xué)改變。MNU首次灌注后第12周隨機處死5只荷瘤大鼠,解剖切開膀胱,發(fā)現(xiàn)膀胱壁增厚、蒼白
3、、菜花狀新生物形成,絕大多數(shù)為多發(fā)腫瘤,嚴(yán)重者已達到充滿膀胱的程度。第12周膀胱腫瘤HE染色呈典型的膀胱移行細(xì)胞癌的表現(xiàn)伴局灶性粘膜下、肌層浸潤。其他臟器未見異常。 2.大蒜素的抑瘤作用。給藥前后荷瘤大鼠體重結(jié)果顯示,生理鹽水組、低濃度大蒜素組的大鼠體重,給藥前后比較,差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05),高濃度大蒜素組的大鼠,給藥后大鼠體重明顯高于給藥前,差異性顯著(P<0.05),且給藥后荷瘤大鼠食欲良好、活動正常、皮毛有光
4、澤。而順鉑組荷瘤大鼠在給藥后體重明顯降低,與給藥前及其他各組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),并表現(xiàn)出明顯的食欲減退、活動遲緩、毛色穢暗。高濃度大蒜素組大鼠膀胱的總重量明顯低于生理鹽水組和低濃度大蒜素組,差異性顯著(p<0.05);低濃度大蒜素組與高濃度大蒜素組比較,差異性顯著(p<0.05);順鉑組與低濃度大蒜素組比較無顯著性差異(p>0.05)。生理鹽水組膀胱腫瘤組織治療前后病理組織學(xué)變化不大,腫瘤細(xì)胞生長活躍,無明顯的死亡
5、情況,而順鉑組和不同濃度的大蒜素組膀胱腫瘤組織出現(xiàn)不同程度的壞死。光鏡下腫瘤細(xì)胞凋亡情況不易觀察。 3.大蒜素誘導(dǎo)膀胱腫瘤凋亡及caspase-3 mRNA、蛋白表達情況。TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn)各組大鼠腫瘤組織細(xì)胞核均出現(xiàn)不同程度的棕褐色染色。與生理鹽水組比較,其他各實驗組AI值均明顯高于生理鹽水組(P<0.05)。而且高濃度大蒜素組同順鉑組、低濃度大蒜素組比較,凋亡作用更明顯,差異有顯著性意義(P<0.05),且隨大蒜素濃度的增
6、加,AI值增高。本實驗發(fā)現(xiàn)大蒜素能夠在mRNA水平上促進膀胱腫瘤組織中caspase-3的表達上調(diào),且表達水平隨濃度升高而上調(diào)。用免疫組化SP法檢測了caspase-3蛋白在大鼠膀胱腫瘤組織中的表達水平,光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)caspase-3蛋白的陽性產(chǎn)物呈棕黃色,位于部分腫瘤細(xì)胞胞漿及部分胞膜中。并且發(fā)現(xiàn)大蒜素能夠上調(diào)caspase-3蛋白在膀胱腫瘤組織中的表達水平。 結(jié)論: 1.MNU膀胱灌注法誘導(dǎo)建立大鼠膀胱腫瘤模
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