鹽酸貝那普利對早期糖尿病大鼠足細胞Podocalyxin表達的影響.pdf

1、目的:觀察鹽酸貝那普利(benazepril hydrochloride)對早期糖尿病大鼠尿中足糖萼蛋白(Podocalyxin,PCX)排泄及腎組織足細胞PCX蛋白表達的影響,初步探討其對糖尿病大鼠腎臟組織的保護作用及可能機制。
　　方法:將健康雄性的Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為正常對照組(NC組)和實驗組。給予實驗組大鼠腹腔一次性注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)65mg/kg建立糖尿病

2、大鼠模型。糖尿病大鼠造模成功后,隨機分為糖尿病組(DM組)和鹽酸貝那普利干預組(DT組),每周檢測各組大鼠的血糖(blood glucose,BG)。4周后,收集大鼠血、尿標本,測定尿白蛋白(urinary albumin,UALB);尿視黃醇結(jié)合蛋白(Urinary retinol binding protein,URBP);尿肌酐(urine creatinine,UCR);尿足糖萼蛋白(UPCX);血甘油三酯(triglyceri

3、de,TG);總膽固醇(total cholesterol,TC);糖化血紅蛋白(HbA1C％)及腎臟肥大指數(shù)(Kidney hypertrophy index,KI)。并采用免疫組化及RT-PCR方法檢測腎組織足細胞PCX蛋白和PCX-mRNA的表達,光鏡及電鏡下觀察腎組織病理結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.4周后,DM組和DT組大鼠HbA1C%、BG、TG、TC值均明顯高于NC組(P<0.01或0.05),DT組與DM

4、組比較,上述指標之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　2.4周后,DM組大鼠UACR、URCR、UPCR、KI值均明顯高于NC組(P<0.01);DT組與DM組比較,上述指標均明顯降低(P<0.01)。相關分析結(jié)果示UPCR與BG、HbA1c、UACR、URCR和KI呈正相關。(r=0.788,0.702,0.797,0.903,0.940,P<0.01)。
　　3.4周后,肉眼觀察各組大鼠腎臟組織,與NC組比較,DM組大

5、鼠的腎臟體積變大,顏色加深,腎臟皮質(zhì)增厚。HE染色后光鏡下可見DM組大鼠腎小球體積較NC組肥大,細胞外基質(zhì)增多,系膜基質(zhì)增生,有些腎小球內(nèi)可見典型K-W結(jié)節(jié);DT組上述病理改變較DM組減輕。
　　4.4周后,DM組和DT組大鼠腎小球平均截面積(mean glomerularcross-sectional area,MGA)和平均體積(mean glomerular volume,MGV)均明顯高于NC組(P<均0.01);DT組與

6、DM組相比,上述指標均明顯降低(P均<0.01)。
　　5.4周后,電鏡下可見NC組的腎小球基底膜(glomerular basement membrane, GBM)均勻,無增厚,足突(foot processes,FP)細胞結(jié)構(gòu)正常,無足細胞融合。與NC組比較,DM組GBM呈不規(guī)則階段性增厚,可見上皮細胞足突破壞,廣泛融合,足突寬度(Foot process width,FPW)增加,足突細胞數(shù)目減少甚至消失,差異有統(tǒng)計學意義

7、(P均<0.01);與DM組比較,DT組GBM無明顯增厚,有少量足突細胞融合,差異有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。
　　6.4周后,免疫組化結(jié)果示PCX主要在腎小球足細胞上表達,NC組可見PCX沿毛細血管袢呈線性強陽性表達,染色濃度深;DM組PCX表達明顯減少或缺失,染色濃度明顯變淺,DT組PCX表達增多。統(tǒng)計學處理后,DM組免疫組化陽性信號的平均光密度(average opticaldensity,AOD)值與NC組比較顯著降低

8、,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);DT組AOD值較DM組顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　7.4周后,凝膠電泳條帶可見DM組條帶亮度明顯降低,說明PCX-mRNA表達量減少。通過光密度值分析見DM組PCX-mRNA表達與NC組比較顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);DT組PCX-mRNA表達較DM組顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　結(jié)論:PCX表達減少可能是糖尿病腎病(DN)發(fā)病機