足細(xì)胞分子α-actinin-4和ZO-1在糖尿病大鼠腎組織的表達(dá)及貝那普利對(duì)其干預(yù)的研究.pdf

1、目的：糖尿病在我國(guó)有較高的發(fā)病率，糖尿病腎病是構(gòu)成終末期腎衰竭的主要危險(xiǎn)因素。蛋白尿是糖尿病腎病的主要臨床表現(xiàn)，也是糖尿病腎病進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。蛋白尿的發(fā)生主要與腎小球?yàn)V過(guò)屏障有關(guān)。濾過(guò)屏障由內(nèi)皮細(xì)胞窗孔，基底膜及足細(xì)胞之間的裂孔隔膜組成。在糖尿病腎病進(jìn)展過(guò)程中足細(xì)胞足突融合，足細(xì)胞數(shù)目減少。最近的研究顯示足細(xì)胞actin網(wǎng)架結(jié)構(gòu)改變是足突融合、消失和蛋白尿發(fā)生的先決條件。Actinin(輔肌動(dòng)蛋白)是一類actin的結(jié)合和交聯(lián)蛋白，

2、可以將松散的肌動(dòng)蛋白actin交聯(lián)成具有收縮力的纖維束，對(duì)于錨定纖維束至胞漿膜具有輔助作用。α-actinin-4是actinin家族的新成員之一，有研究發(fā)現(xiàn)編碼α-actinin-4的基因ACTN4突變可導(dǎo)致局灶節(jié)段性腎小球硬化的發(fā)生，足細(xì)胞α-actinin-4表達(dá)的改變與足突融合，蛋白尿的產(chǎn)生密切相關(guān)。Z0-1是一種連接蛋白，在上皮細(xì)胞間的緊密連接處表達(dá)。在腎小球，Z0-1起到將足細(xì)胞間的裂孔隔膜連接到足細(xì)胞的細(xì)胞骨架上的作用。Z

3、0-1在上皮細(xì)胞間的緊密連接處的正確定位及表達(dá)對(duì)于細(xì)胞間通透性的維持具有重要作用。 足細(xì)胞是位于腎小球?yàn)V過(guò)膜最外層的細(xì)胞。在PimaIndian 2型糖尿病病人身上發(fā)現(xiàn)在糖尿病腎病發(fā)展過(guò)程中，足細(xì)胞數(shù)目明顯減少，足細(xì)胞數(shù)目減少的程度與蛋白尿的程度呈正相關(guān)，而且與進(jìn)展至終末期腎衰竭(ESRD)的快慢相平行。在實(shí)驗(yàn)性糖尿病動(dòng)物的研究發(fā)現(xiàn)，足細(xì)胞的減少可被RAS阻斷劑ACEI類藥物所改善。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用糖尿病大鼠模型，觀察糖尿病大鼠腎組織

4、中α-actinin-4，Z0-1蛋自及mRNA的表達(dá)變化以及在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中足細(xì)胞數(shù)目的變化，探討α-actinin-4，Z0-1分子在糖尿病腎病蛋白尿形成中的可能作用，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑貝那普利對(duì)糖尿病大鼠腎組織足細(xì)胞數(shù)目、α-actinin-4、Z0-1蛋白和mRNA表達(dá)變化的影響，及其腎保護(hù)作用的機(jī)制。 方法：采用健康雄性SD大鼠54只，體重170-220g，隨機(jī)抽取18只作為正常對(duì)照組，其余36只大鼠給

5、予2％鏈脲菌素(STZ)60mg/Kg一次性腹腔注射。72小時(shí)血糖≥16.7mmol/L確定為糖尿病大鼠模型，而后隨機(jī)分為糖尿病組和貝那普利干預(yù)組各18只。貝那普利干預(yù)組給予貝那普利10mg/Kg.d灌胃，每日一次，正常對(duì)照組與糖尿病組僅給予等量自來(lái)水灌胃，每日一次。實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由飲水、標(biāo)準(zhǔn)飲食，不使用胰島素及其他降糖藥物。實(shí)驗(yàn)開始后第8周、12周各組任取6只大鼠測(cè)定血糖、盤肌酐、尿肌酐、腎重/體重，計(jì)算肌酐清除率、尿自蛋自排泄率。處

6、死大鼠，留取左腎皮質(zhì)，分別做組織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腎小球α-actinin-4、 Z0-1蛋白表達(dá)及WT-1標(biāo)記的足細(xì)胞數(shù)目，應(yīng)用RT-PCR觀察α-actinin-4、Z0-1mRNA在腎組織中的表達(dá)。 結(jié)果：在8周、12周，糖尿病組血糖、肌酐清除率、腎重/體重、尿白蛋白排泄率較正常對(duì)照組均有不同程度的升高(P<0.01)而貝那普利干預(yù)組肌酐清除率、腎重/體重、尿白蛋白排泄率顯著低于同時(shí)期糖尿病組(P<0.05

7、)。腎小球光鏡病理切片PAS染色糖尿病組嗜PAS物質(zhì)較同時(shí)期正常組明顯增多，電鏡觀察糖尿病組在8周時(shí)出現(xiàn)基底膜不規(guī)則增厚，系膜區(qū)增寬，上皮細(xì)胞足突融合，12周時(shí)上述變化更加顯著，貝那普利干預(yù)組較同時(shí)期糖尿病組變化明顯減輕。糖尿病組大鼠腎組織α-actinin-4蛋白及mRNA表達(dá)在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)較正常組均明顯增加(P<0.01)，貝那普利干預(yù)組在8周時(shí)其表達(dá)較糖尿病組顯著下降(P<0.05)，而在12周時(shí)其表達(dá)較糖尿病組仍下降，卻無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

8、義。糖尿病組大鼠腎組織Z0-1蛋白及mRNA表達(dá)在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)較正常組均明顯減少(P<0.05)，貝那普利干預(yù)組在8周時(shí)其表達(dá)較糖尿病組顯著增加(P<0.05)，而在12周時(shí)其表達(dá)較糖尿病組仍增加，卻無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。糖尿病組大鼠足細(xì)胞數(shù)目在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯減少(P<0.05)，貝那普利干預(yù)組大鼠足細(xì)胞數(shù)目較糖尿病組明顯增加(P<0.05)。α-actinin-4與足細(xì)胞數(shù)目呈負(fù)相關(guān)關(guān)系r=-0.957 P=0.0027，Z0-1的表達(dá)與足細(xì)

9、胞數(shù)目呈正相關(guān)r=0.923 p=0.0086，而足細(xì)胞數(shù)目與尿蛋白量呈負(fù)相關(guān)r=0.923 p=0.0086。結(jié)論： 1、糖尿病大鼠腎皮質(zhì)α-actinin-4蛋白及mRNA表達(dá)上調(diào)，Z0-1編碼蛋白及其mRNA表達(dá)下降，腎小球足細(xì)胞數(shù)目減少。 2、α-actinin-4的表達(dá)與足細(xì)胞數(shù)目呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，Z0-1的表達(dá)與足細(xì)胞數(shù)目呈正相關(guān)關(guān)系，而足細(xì)胞數(shù)目與尿蛋白量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。 3、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑貝那普