2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、腫瘤細(xì)胞對多種化療藥物產(chǎn)生的多藥耐藥性MDR(multidrugresistance)是臨床化療失敗的主要原因,MDR的形成機(jī)制復(fù)雜,目前認(rèn)為MDRl基因(multidrugresistancegene1)表達(dá)異常是導(dǎo)致MDR產(chǎn)生的主要因子。在胰腺癌的臨床診治工作中,探討胰腺癌中MDRl基因的表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控有重要的研究價(jià)值。 臨床研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)法和RT-PCR技術(shù)分別從蛋白和基因水平檢測MDRl基因在胰腺癌臨床標(biāo)本中的表

2、達(dá),并研究其與胰腺癌根治性術(shù)后生存時間之間的關(guān)系。研究結(jié)果表明,MDRl基因的蛋白表達(dá)產(chǎn)物P-gp在胰腺癌中的表達(dá)(陽性率79.3%)明顯高于正常胰腺、癌旁組織和胰腺良性腫瘤;RT-PCR證實(shí)同樣的結(jié)果;P-gp與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程度、TNM分期以及術(shù)前是否行介入化療方面無顯著性差異,但對根治性術(shù)后生存時間有一定的影響。 實(shí)驗(yàn)研究通過RT-PCR檢測MDRl基因在兩株胰腺癌細(xì)胞株AsPC.1和BxPC-3中的

3、表達(dá),發(fā)現(xiàn)均有較高水平的基礎(chǔ)表達(dá)。BxPC-3為原發(fā)癌細(xì)胞株,且其MDRl基因表達(dá)要略強(qiáng)于在AsPC.1細(xì)胞,因此選擇BxPC-3細(xì)胞株作為進(jìn)一步的研究對象。在體外通過逐步增加阿霉素(ADM)濃度篩選,成功構(gòu)建了胰腺癌多藥耐藥細(xì)胞株BxPC-3/ADM,發(fā)現(xiàn)MDRl在誘導(dǎo)早期的耐藥中起主導(dǎo)作用,在后期則和多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)協(xié)同發(fā)揮作用;我們通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將MDRlcDNA轉(zhuǎn)入BxPC-3細(xì)胞,成功獲得了短時的MDRl高表達(dá),穩(wěn)

4、定轉(zhuǎn)染的單克隆表達(dá)尚有待進(jìn)一步的研究。 利用RNA干擾技術(shù),設(shè)計(jì)合成了針對MDRl基因的siRNA,并在其上下游分別引入BglII和HindlII限制性酶切位點(diǎn),通過雙酶切連接反應(yīng)將MDRlsiRNA插入質(zhì)粒載體RetropSuper多克隆位點(diǎn)中的BglII和HindIII之間,以此構(gòu)建MDRlsiRNA真核表達(dá)質(zhì)粒Re仃0DSuper-MDRlsiRNA,應(yīng)用RT-PCR行酶切鑒定,結(jié)果顯示MDRlsiRNA成功地載入了質(zhì)粒。

5、采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將MDRlsiRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株BxPC.3,應(yīng)用RT-PCR和Westernblot方法檢測BxPC一3細(xì)胞中MDRl在基因和蛋白水平的表達(dá)變化,研究結(jié)果顯示MDRlsiRNA表達(dá)質(zhì)粒能顯著抑制胰腺癌細(xì)胞BxPC-3中MDRl基因的表達(dá),MDRl的蛋白表達(dá)水平亦受到明顯抑制。 結(jié)論:研究結(jié)果表明,胰腺癌中MDRl呈高表達(dá),并對根治術(shù)后生存時間有一定的影響。胰腺癌細(xì)胞株AsPC-1和BxPC-3存

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