Pygopus2與FoxO1對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDR1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：乳腺癌是嚴(yán)重威脅女性生命健康與生活質(zhì)量的主要癌癥之一，發(fā)病率在世界范圍內(nèi)逐年增高。細(xì)胞耐藥是腫瘤治療失敗的眾多原因之一，而細(xì)胞的耐藥性則源于過(guò)量表達(dá)MDR1基因(multidrug resistance1,MDR1)。MDR1基因可以通過(guò)多種不同的機(jī)制激活，導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。在乳腺癌細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)Wnt信號(hào)通路調(diào)節(jié)MDR1的表達(dá)。而Pygopus2(Pygo2)是Wnt信號(hào)途徑中的一個(gè)主要的效應(yīng)蛋白。Pygopus2蛋白募集能促使

2、β-catenin轉(zhuǎn)錄激活Wnt靶基因從而參與人類多種疾病的發(fā)生發(fā)展，尤其是腫瘤性疾病。因此，Pygopus2對(duì)于乳腺癌耐藥有一定的研究?jī)r(jià)值。FoxO1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)能夠結(jié)合在MDR1啟動(dòng)子上的FoxO結(jié)合位點(diǎn)上，起到轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用。FoxO1通過(guò)結(jié)合β-catenin，進(jìn)而起到抑制Wnt信號(hào)途徑的作用。因此，本課題一方面通過(guò)改變Pygopus2的表達(dá)對(duì)人乳腺癌細(xì)

3、胞MCF-7與MCF/ADR中MDR1的表達(dá)的影響，另一方面通過(guò)FoxO1片段的構(gòu)建，驗(yàn)證FoxO1與Pygopus2、MDR1的表達(dá)有關(guān)。揭示Pygopus2有望成為乳腺癌耐藥治療靶點(diǎn)和檢測(cè)指標(biāo)。
　　方法：1.構(gòu)建dnFoxO1-A、dnFoxO1-B、dnFoxO1-C質(zhì)粒。
　　2.將pLL3.7-hPygo2-KD、pGL3.3-contol、HA-hPygo2、Pcmv-HA、dnTCF4、pLL3.7-LEF/

4、TCF、pLL3.7-FoxO1、dnFoxO1-A、dnFoxO1-B、dnFoxO1-C質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入MCF-7與MCF/ADR細(xì)胞內(nèi)。
　　3.Realtime-PCR、Western bloting等測(cè)定Pygopus2、MDR1分別在MCF-7和MCF/ADR中的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.通過(guò)Western bloting和Rrealtime-PCR的方法，發(fā)現(xiàn)在MCF-7與MCF/ADR細(xì)胞株中，Pygopus2與MDR

5、1均有表達(dá)，且Pygopus2表達(dá)水平在MCF/ADR中明顯高于MCF-7。
　　2.通過(guò)在MCF-7與MCF/ADR細(xì)胞株中慢病毒載體過(guò)表達(dá)Pygop us2和knock-down Pygopus2，檢測(cè)到MDR1的表達(dá)隨之增高和降低。
　　3.本次實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了dnFoxO1質(zhì)粒，在MCF-7細(xì)胞系過(guò)表達(dá)dominant negative的TCF和FoxO1（dnTCF4,dnFoxO1）,Realtime-PCR檢測(cè)Pyg

6、opus2表達(dá)水平不同程度的降低，表明dnTCF4抑制β-catenin/TCF4復(fù)合物轉(zhuǎn)錄活性, FoxO通過(guò)與TCF4競(jìng)爭(zhēng)β-catenin，進(jìn)而降低TCF4轉(zhuǎn)錄激活 Wnt信號(hào)下游基因的作用,抑制Pygopus2的激活，調(diào)控MDR1的表達(dá)。
　　結(jié)論：1.Pygopus2的表達(dá)與乳腺癌耐藥存在相關(guān)性。
　　2. Pygopus2與MDR1在乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF/ADR中高表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞株MCF-7。
　　3.