膠質(zhì)瘤中S100A4的表達和其在膠質(zhì)瘤細胞侵襲遷移中作用的研究.pdf

1、惡性膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，現(xiàn)階段的臨床治療原則是以手術(shù)為主、輔以放射和化學(xué)藥物治療的綜合治療。單憑現(xiàn)有的臨床方案，雖然在一定程度上提高了患者的生存質(zhì)量及或延長了生存期，但尚不能治愈。由于惡性膠質(zhì)瘤侵襲、播散性的生長方式，患者即使接受了規(guī)范化治療，中位生存期也僅為14個月。而針對腫瘤惡性進展的分子靶向治療為膠質(zhì)瘤的治愈提供了可能。近些年來，研究主要集中在膠質(zhì)瘤分子生物學(xué)的機制上，力圖尋找新的分子靶點，并通過抑制這些靶點對膠質(zhì)

2、瘤的生長、增殖、遷移和侵襲起到抑制作用。
　　S100A4是S100蛋白超家族成員之一，是一種低分子量（10-12KDa）、鈣離子依賴性的蛋白，以同源或異源二聚體的形式存在于細胞的胞質(zhì)、胞核或胞質(zhì)胞核共存。S100A4蛋白與其他家族成員一樣，不具有酶促的活性，而是通過調(diào)控其他蛋白的表達和直接與靶蛋白結(jié)合兩種方式發(fā)揮作用。相關(guān)研究表明， S100A4具有廣泛的生物學(xué)功能，與許多惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系，提示S100A4可能成

3、為治療惡性膠質(zhì)瘤分子生物學(xué)靶點的其中一員。
　　惡性膠質(zhì)瘤細胞在腦組織中的遷移運動大體可分為四個步驟：①膠質(zhì)瘤細胞脫離原發(fā)的腫瘤團塊；②膠質(zhì)瘤細胞粘附于細胞外基質(zhì)；③膠質(zhì)瘤細胞降解細胞外基質(zhì)；④膠質(zhì)瘤細胞改變自身形狀，細胞體向前運動。抑制膠質(zhì)瘤向周圍正常腦組織浸潤或者復(fù)發(fā)，控制膠質(zhì)瘤細胞這種遷移運動是有效方法之一。本課題在膠質(zhì)瘤組織和細胞系中檢測S100A4的表達，并通過體外實驗在高表達S100A4的膠質(zhì)瘤細胞系中探究其在上述細胞

4、遷移運動四個步驟中的作用及其機制。課題研究分為以下兩個部分：
　　1、檢測S100A4在膠質(zhì)瘤組織及細胞系中的表達。首先對本院手術(shù)留取的43例不同級別的膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本及11例對照腦組織標(biāo)本進行免疫組織化學(xué)染色，檢測不同標(biāo)本中S100A4的表達含量；然后采用Real-time PCR、Western blot方法分別檢測了胃黏膜上皮細胞系GES-1和四個惡性膠質(zhì)瘤細胞系中S100A4 mRNA和蛋白的表達量。結(jié)果顯示，S100A4在

5、對照腦組織中呈陰性或弱陽性表達，在膠質(zhì)瘤組織中呈陽性表達，陽性結(jié)果表現(xiàn)為胞核陽性、胞質(zhì)陽性或者核質(zhì)陽性，并且隨著腫瘤級別的增高陽性率也增高；以胃黏膜上皮細胞系GES-1為對照，S100A4 mRNA和蛋白在U87、LN229、U251和SNB19這4個膠質(zhì)瘤細胞系中均顯著高表達，PCR和Western blot的檢測結(jié)果一致。
　　2、體外實驗研究S100A4在膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲中的作用。在SNB19和U251兩種細胞系中，用S

6、100A4特異性的siRNA進行處理，并且相應(yīng)的分成control組、siRNA-NC組和siRNA-S100A4組。在不同的處理組中，PCR和Western blot檢測S100A4 mRNA和蛋白的表達情況，劃痕實驗檢測膠質(zhì)瘤細胞的遷移能力，Transwell實驗檢測膠質(zhì)瘤細胞侵襲的能力，Western blot技術(shù)檢測膠質(zhì)瘤細胞E-cadherin、N-cadherin、Vimintin、MMP-9和MMP-2的表達量，免疫熒光技

7、術(shù)檢測S100A4的表達情況與細胞片狀偽足、細胞黏著斑的形成情況。免疫共沉淀技術(shù)和免疫熒光技術(shù)分別檢測S100A4蛋白與非肌細胞肌球蛋白IIA亞型（NM IIA）的結(jié)合情況。結(jié)果顯示：S100A4特異性的siRNA可以有效的敲低膠質(zhì)瘤細胞中S100A4的表達，進而抑制細胞遷移和侵襲的能力；與control組和siRNA-NC組相比，siRNA-S100A4組膠質(zhì)瘤細胞E-cadherin的表達明顯上調(diào)， N-cadherin、Vimin

8、tin、MMP-9和MMP-2的表達明顯降低。在膠質(zhì)瘤細胞中， S100A4蛋白能與NM IIA相結(jié)合，并主要定位于細胞的前端片狀偽足處；siRNA-S100A4組細胞的片狀偽足明顯變小或者不在向前伸出，黏著斑變大、熒光強度變強。
　　結(jié)論：
　　1、與對照腦組織相比，膠質(zhì)瘤組織中S100A4呈高表達，并且高級別膠質(zhì)瘤組織中S100A4的表達量明顯高于低級別膠質(zhì)瘤組織中的表達量。
　　2、在惡性膠質(zhì)瘤細胞系中，S100