MicroRNA-23a在膠質(zhì)瘤中的功能和作用機(jī)制研究.pdf

1、MicroRNAs(miRNAs)是一類大小約22個(gè)核苷酸、進(jìn)化上高度保守的非編碼單鏈RNA,它主要是通過與靶mRNA3‘UTR區(qū)非特異性的互補(bǔ)，引起靶mRNA降解或者翻譯抑制，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)特定基因的表達(dá)。近年來許多研究證明，miRNAs表達(dá)水平的異常與人類腫瘤密切相關(guān)，miRNAs參與到了細(xì)胞發(fā)育的各個(gè)階段中，包括細(xì)胞的增殖、凋亡和變異等。
　　膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中最常見的惡性腫瘤，病死率高，其發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，目前尚

2、不十分明確。近30年來，膠質(zhì)瘤的診治有了長足進(jìn)步。例如，分子生物學(xué)和遺傳學(xué)研究明確了少數(shù)膠質(zhì)瘤的性質(zhì)和生物學(xué)行為屬良性，如纖毛型星形細(xì)胞瘤，預(yù)后好；發(fā)現(xiàn)惡性膠質(zhì)瘤中對化療、放療敏感的生物學(xué)標(biāo)志，如MGMT基因啟動(dòng)子甲基化、染色體1p、19q雜合子丟失；癌基因譜（TCGA）發(fā)現(xiàn)多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）多于47個(gè)基因突變等。其中miRNA作為一種非編碼RNA基因，在膠質(zhì)瘤中常見失控表達(dá)。我們使用高通量芯片初查及Northernblot方法

3、，初步分析了多個(gè)潛在癌miRNAs（onco-miRNAs）在膠質(zhì)瘤組織及相關(guān)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，在7對膠質(zhì)瘤組織中有6例膠質(zhì)瘤組織miR-23a表達(dá)明顯高于其瘤旁組織。隨后擴(kuò)大樣本Real-timePCR分析了100對膠質(zhì)瘤中miR-23a的表達(dá)。結(jié)果顯示：在這100對膠質(zhì)瘤組織中有79例標(biāo)本的miR-23a表達(dá)水平高于于其相應(yīng)的瘤旁組織。對腫瘤組織和瘤旁組織進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)miR-23a在腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于瘤

4、旁組織。因此，我們推測miR-23a可能作為onco-miRNAs，在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要調(diào)控作用。
　　為探究miR-23a在膠質(zhì)瘤中的生物學(xué)特性，我們選擇引入anti-miR-23a來敲低其在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)，然后驗(yàn)證其對膠質(zhì)瘤細(xì)胞腫瘤相關(guān)表型的影響。結(jié)果顯示：抑制miR-23a后，U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲、遷移能力減緩，細(xì)胞周期停滯，細(xì)胞凋亡增加。隨后我們利用生物信息學(xué)及分子生物學(xué)方法對其靶基因進(jìn)行了初步鑒定，