凋亡抑制蛋白基因XIAP在卵巢上皮性癌中的研究.pdf

1、卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，發(fā)病率約占5～7/10萬。因?yàn)槠淦鸩‰[匿，60～70﹪的病人表現(xiàn)為分期較晚，需要接受較大的手術(shù)、精細(xì)而頻繁復(fù)雜的輔助化療，5年生存率始終在30﹪左右。卵巢癌已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅女性生命和健康的主要腫瘤。而卵巢上皮性癌則在所有的婦科惡性腫瘤中具有較高的病死率，局部浸潤和轉(zhuǎn)移則是致病人死亡的主要原因。因此探索其浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制，尋找有價(jià)值的可以預(yù)測轉(zhuǎn)移及指導(dǎo)臨床治療的生物學(xué)指標(biāo)成了卵巢腫瘤研究的熱點(diǎn)。

2、1996年， Liston等<'[1]>運(yùn)用Southern雜交和PCR技術(shù)在人胚胎腦組織中克隆出凋亡抑制蛋白(Inhibitotr of apoptosis proteins，IAPs)家族的新基因。該基因定位于Xq25，故命名為X連鎖的凋亡抑制蛋白 (X-linkedinhibitor of apoptosis protein，XIAP)基因。作為IAPs的一名新成員，XIAP基因的凋亡抑制作用在多種腫瘤組織中已經(jīng)得到證實(shí)。大量研究

3、表明，XIAP的過表達(dá)參與腫瘤的進(jìn)展，與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。本文旨在探討：1、XIAP基因在人卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其表達(dá)水平的變化與卵巢上皮性癌臨床、病理等因素的關(guān)系。通過統(tǒng)計(jì)分析，篩選出與卵巢上皮性癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的危險(xiǎn)因素，從而為臨床治療、隨診以及預(yù)后判斷提供理論依據(jù)。2、通過觀察化療藥物紫杉醇、順鉑作用后卵巢上皮性癌細(xì)胞株3AO、SKOV3中XIAP基因表達(dá)的變化，為臨床卵巢上皮性癌侵襲轉(zhuǎn)移的治療和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定理論基礎(chǔ)

4、。 第一部分 目的：通過對不同年齡、臨床分期、組織學(xué)分級、病理類型、淋巴結(jié)(或遠(yuǎn)處)轉(zhuǎn)移以及有無癌性腹水(或腹腔沖洗液)的卵巢上皮性癌組織中XIAP基因表達(dá)進(jìn)行研究，探討XIAP基因表達(dá)與其臨床病理各相關(guān)因素的相關(guān)性。 方法：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測50例卵巢上皮性癌標(biāo)本及12例正常卵巢標(biāo)本的卵巢組織中XIAP mRNA的表達(dá)，半定量分析電泳結(jié)果。卵巢上皮性癌與正常卵巢組織中XIAP基因表達(dá)

5、的關(guān)系采用x<'2>檢驗(yàn)和Fisher’s精確概率檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。XIAP基因表達(dá)水平與卵巢上皮性癌的臨床病理因素之間的關(guān)系采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：1、在12例正常卵巢組織標(biāo)本中XIAP陽性表達(dá)率為13.3﹪， 50例卵巢上皮性癌標(biāo)本中XIAP陽性表達(dá)率為74﹪，二者差異有顯著性(P<0.01)。2、不同臨床分期的腫瘤組織中XIAP基因表達(dá)陽性率之間的差異有顯著性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3、腹水或

6、腹腔沖洗液查見癌細(xì)胞者XIAP的表達(dá)幾乎全為陽性，表達(dá)強(qiáng)度明顯高于腹水或腹腔沖洗液者未查見癌細(xì)胞者，分期晚者表達(dá)更強(qiáng)，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著(P<0.01)。4、高分化與低分化卵巢癌組織的XIAP基因表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論：1、卵巢上皮性癌組織中XIAP mRNA的表達(dá)強(qiáng)于正常卵巢組織。2、XIAP的高表達(dá)與卵巢癌的臨床分期呈正相關(guān)，與癌性腹水形成有明顯的相關(guān)性。3、檢測XIAP表達(dá)水平對早期診斷卵巢癌及判斷卵巢癌的臨床

7、進(jìn)展有一定的參考價(jià)值。 第二部分 目的：探討XIAP基在卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及3AO中的表達(dá)。研究紫杉醇、順鉑及二者聯(lián)合作用對人卵巢上皮性癌細(xì)胞株SK0v3及3AO的生長抑制作用，及其對SKOV3及3AO細(xì)胞株中xIAP基因表達(dá)的影響，并初步探討其作用機(jī)制。 方法：倒置顯微鏡下觀察SKOV3、3AO細(xì)胞在不同濃度的各組化療藥物作用下形態(tài)學(xué)的變化；采用RT—PCR和免疫組化SABC法檢測SKov3、3AO細(xì)胞中X

8、IAP mRNA和蛋白的表達(dá)，及一定濃度梯度的化療藥物(順鉑、紫杉醇、順鉑+紫杉醇)作用后細(xì)胞內(nèi)XIAP表達(dá)的變化，MTT法測定藥物作用后細(xì)胞的存活率，并分析XIAP的表達(dá)與細(xì)胞生存率的關(guān)系。 結(jié)果：1、XIAP mRNA和蛋白在SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)高于3AO細(xì)胞，同濃度同種藥物作用下SKOV3細(xì)胞存活率及XIAP蛋白表達(dá)高3AO(P<0.05)，1μ/ml順鉑對細(xì)胞幾乎無影響，同濃度紫杉醇作用強(qiáng)于順鉑(P<0.05)，紫杉醇

9、與順鉑聯(lián)用作用強(qiáng)于兩種藥物單用(P<0.05)；隨藥物濃度增高，細(xì)胞XIAPmRNA及蛋白表達(dá)逐漸減少，細(xì)胞存活率逐漸降低，XIAP的表達(dá)與細(xì)胞存活率有線性回歸及相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。2、MTT檢測結(jié)果顯示紫杉醇、順鉑對SKOV3/3A0細(xì)胞的生長抑制作用呈明顯的劑量依賴關(guān)系，而聯(lián)合用藥對SKOV3/3A0細(xì)胞的生長抑制作用較單獨(dú)作用顯著。 結(jié)論：1、紫杉醇、順鉑聯(lián)合作用可增加對卵巢上皮性癌SKOV3/3AO細(xì)胞的生長抑制率