多種食品過(guò)敏原體外快速檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、　　[目的] 探討用致敏肥大細(xì)胞的組胺釋放率鑒定與評(píng)價(jià)食品過(guò)敏原的方法；建立能同時(shí)檢測(cè)多種食品過(guò)敏原的dot-ELISA診斷技術(shù)。
　　[方法] 以蝦、花生和雞蛋清蛋白浸液作為致敏原,氫氧化鋁為佐劑免疫BALB/c小鼠,建立IgE高反應(yīng)性食物過(guò)敏動(dòng)物模型。間接ELISA測(cè)定血清中特異性IgE(slgE)；分離小鼠腹腔肥大細(xì)胞,過(guò)敏原體外激發(fā),電鏡觀察過(guò)敏原刺激前、后肥大細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,熒光法檢測(cè)肥大細(xì)胞的組胺定向釋放率。Weste

2、rn blot分析過(guò)敏原浸液中主要的過(guò)敏性組分,并用陰離子交換層析將其分離純化。dot-ELISA檢測(cè)過(guò)敏原sIgE,并探索其最佳反應(yīng)條件。
　　[結(jié)果] 模型組小鼠血清sIgE和肥大細(xì)胞組胺釋放率均比對(duì)照組明顯升高,提示過(guò)敏模型復(fù)制成功。過(guò)敏原激發(fā)后第14d slgE效價(jià)最高,蝦、花生和雞蛋清蛋白組分別達(dá)到1/6400,1/6400和1/3200；雞蛋清蛋白組肥大細(xì)胞的組胺釋放率達(dá)60.75%,河蝦組腹腔或皮下免疫分別達(dá)到71.

3、53%和88.48%。電鏡觀察顯示,脫顆粒肥大細(xì)胞胞漿出現(xiàn)很多空泡,致密性顆粒減少。Western blot鑒定顯示蛋清中主要過(guò)敏性組分為OVA,相對(duì)分子量40kD；蝦中主要過(guò)敏性組分為Pen m2,相對(duì)分子量36kD。初步建立了能同時(shí)檢測(cè)多種過(guò)敏原的dot-ELISA實(shí)驗(yàn)方案,dot-ELISA中各種過(guò)敏原最適包被量為2μL(10μg蛋白),待檢抗血清最佳稀釋度為1：80,通過(guò)觀察NC膜上的斑點(diǎn)即可確定待檢血清中的sIgE類型,且三種