hGRβ和剪接因子SRp30c mRNA的表達與糖皮質激素敏感性的相關性研究.pdf

1、背景糖皮質激素(GC)是臨床上治療許多慢性炎癥性疾病的首選藥物。大多數患者通過應用激素能夠取得滿意療效，但有部分患者對激素治療不敏感，稱為激素抵抗型患者[1]。激素抵抗現(xiàn)象在哮喘、慢性鼻竇炎、腎病綜合征、類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、過敏性皮炎等許多疾病中都有報道，它更像是一種獨立的疾病為其臨床治療提出了一個嚴峻的挑戰(zhàn)。因此，了解激素抵抗的發(fā)生機制顯得尤其重要。GC是通過糖皮質激素受體(hGR)發(fā)揮藥理作用的。人的細胞中

2、存在兩種hGR亞型——hGR0和hGRβ，它們是由hGR基因的初級轉錄產物pre-mRNA經過不同的剪接途徑而產生。hGRα可以與GC結合進而介導GC的抗炎、抗免疫等生物學效應，而hGRB被認為是hGRQ的內源性抑制因子。國內外已有許多研究證據表明激素抵抗的發(fā)生與hGRB表達異常增多有關。近來又有研究提示富含絲氨酸／精氨酸蛋白家族(serine／arginine-richproteins，SR蛋白家族)成員SRp30c在促進正常人中性粒

3、細胞的hGRpre—mRNA發(fā)生選擇性剪接形成編碼hGRβmRNA的過程中發(fā)揮重要作用。因此，剪接因子SRp30c可能在激素抵抗型患者體內表達異常增高從而刺激hGRpre—mRNA的選擇性剪接途徑致使hGRB表達增多，結果拈抗hGRa的作用導致患者對激素反應不敏感。 目的:探討人外周血單個核細胞(PBMC)中糖皮質激素受體Q和β(hGRα和hGRB)，剪接因子SRp30cmRNA的表達水平與糖皮質激素治療效應之間的關系，以及通過

4、觀察SRp30c與hGRβ表達之間的關系，探討其在hGRpre-mRNA剪接中的作用。 方法:收集14例激素抵抗患者和14例激素敏感患者(分別包括5例哮喘患者、5例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和4例腎病綜合征患者)、12例健康對照者，激素抵抗的入選標準根據文獻上各病種對SR的定義。取受試者外周靜脈血，分離出單個核細胞，用TRIZOL試劑提取RNA并反轉錄成cDNA，設計并合成hGRQ、hGRβ、SRp30c及內參照6APDH(甘油醛3磷酸

5、脫氫酶)的引物，采用逆轉錄一聚合酶鏈反應(RT—PCR)的方法擴增受試者PBMC中特異性目的產物，掃描目的條帶(hGRQ、hGRβ及SRp30c)的光密度值，將其與GAPDH條帶光密度值的比值作為其表達水平的定量指標。 結果:激素抵抗組、激素敏感組及正常人體內均有hGRα、β和SRp30c的表達。各擴增產物片段大小與理論設計要求所得的片段長度相符。hGRα、β和SRp30c的表達在三個不同病種間無顯著性差異。三組hGRQmRNA

6、表達水平差異無統(tǒng)計學意義，其hGRa／甘油醛3磷酸脫氫酶(GAPDH)mRNA分別為1．44±O．14，1．46±0．¨，1．52±0．10；但激素抵抗組hGR0mRNA表達明顯高于激素敏感組和正常對照組(P<0．01)，其hGRB／GAPDHmRNA分別為0．53±0．08，0．43±O．05，0．41±0．07；激素抵抗組SRp30cmRNA表達也明顯高于激素敏感組和正常對照組(P<0．01)，其SRp30c／GAPDHmRNA分別