二甲雙胍對大鼠NAFLD的作用及對肝細胞脂性凋亡PLA2-LPC通路的影響.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一類肝臟病理改變類似于酒精性脂肪肝而無飲酒史的慢性肝臟疾病，包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化等發(fā)展階段。二次打擊學說是目前最為廣泛接受的發(fā)病機制。胰島素抵抗、氧化應激和脂質過氧化作用形成了一個使肝細胞受到持續(xù)打擊的連續(xù)的破壞鏈。胰島素抵抗既是第一次打擊的源頭又是貫穿整個疾病發(fā)展的病理基礎，肝細胞脂性凋亡是NAFLD最鮮明的病理特點。研究發(fā)現(xiàn)脂肪酸代謝途徑中PLA2/LPC激活是肝細胞走向凋

2、亡的關鍵步驟。因此，改善胰島素抵抗的治療有可能會阻止NAFLD的發(fā)生和發(fā)展。鹽酸二甲雙胍是目前唯一被美國FDA批準可用于10歲以上兒童青少年2型糖尿病治療的藥物，它可以增加胰島素的敏感性。但在肝臟脂質聚積的初始階段以及NAFLD形成以后，給予二甲雙胍治療，是否能減輕或改善肝臟的脂肪代謝、脂質沉積，能否干擾PLA2/LPC通路，阻斷肝細胞脂性凋亡的發(fā)生，對NAFLD起到預防和治療作用，目前尚不清楚。本研究以高脂飲食的NAFLD大鼠為模型，

3、著重評估二甲雙胍在改善脂肪酸代謝中的作用以及它對肝細胞凋亡PLA2/LPC途徑的影響，為臨床預防和治療非酒精性脂肪性肝病提供新的方法。
　　 目的：通過觀察二甲雙胍干預和治療NAFLD大鼠的療效來研究其在脂肪酸代謝中的作用及其對肝細胞脂性凋亡PLA2/LPC途徑的影響。
　　 方法：⑴98只雄性SD大鼠，體質量160～190 g，鼠齡4～6 wk。二甲雙胍預防試驗：50只大鼠隨機分成以下4組：普通飲食組I(I組)12只、

4、高脂飲食組I(II組)12只、二甲雙胍組(III組)13只、葫蘆素組(IV組)13只，喂養(yǎng)10周。二甲雙胍治療試驗：48只大鼠隨機分成以下4組：高脂飲食組II(V組)12只：高脂飲食喂養(yǎng)12周后繼續(xù)高脂喂養(yǎng)4周；高脂飲食+二甲雙胍組(VI組)12只：高脂飲食喂養(yǎng)12周后繼續(xù)高脂飲食+二甲雙胍喂養(yǎng)4周；普通飲食+二甲雙胍組(Ⅶ組)12只：高脂飲食喂養(yǎng)12周后改為普通飲食+二甲雙胍喂養(yǎng)4周；普通飲食組II(VIII組)：高脂飲食喂養(yǎng)12周后

5、改為普通飲食喂養(yǎng)4周，喂養(yǎng)結束同時處死。⑵測定大鼠血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、脂蛋白a(LPa)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)、游離脂肪酸(FFA)、溶血磷脂酰膽堿(LPC)，胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)、分泌型磷脂酶A2(sPLA2)，鈣非依賴性磷脂酶A2(iPLA2)、瘦素等指標，在光鏡下觀察大鼠肝臟形

6、態(tài)學改變，在透射電鏡下觀察肝細胞、線粒體及其他細胞外基質的超微結構變化。所有資料采用SPSS12.0軟件分析。計量資料以均數(shù)士標準差表示，各組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩兩比較采用最小顯著性差異法LSD方法。非正態(tài)分布資料(FINS，HOMA-IR，IAI，F(xiàn)PG/FINS)，經開平方根轉換成正態(tài)分布資料后，再做統(tǒng)計。計數(shù)資料的比較用卡方檢驗，結果以P<0.05有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：①在

7、高脂飲食同時給予二甲雙胍干預，可以明顯減輕大鼠的體重、肝重，血清ALT、TG、LDL、FFA、LPC、sPLA2、瘦素、空腹血清胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、肝臟TG、CHO、脂肪變性程度都明顯低于高脂飲食組(P<0.05)。②在高脂飲食同時給予葫蘆素片治療，其降低血清ALT的作用明顯，但對血脂代謝指標(TG、CHO、LDL)，胰島素抵抗指標(空腹血清胰島素、HOMA-IR、IAI)，血清FFA、LPC、瘦素，肝臟TG、CHO的改善及減輕肝細

8、胞脂肪變性的作用，不如二甲雙胍。③NAFLD形成以后，給予普通飲食+二甲雙胍治療，大鼠的肝重、體重、血清ALT、TG、CHO、LPa、LDL、HOMA-IR、FFA、LPC、sPLA2、瘦素、肝TG、CHO、脂肪變性程度均明顯低于繼續(xù)高脂飲食組；給予普通飲食治療，大鼠的體重、肝重、LPC、瘦素、肝TG、CHO、脂肪變性程度也明顯低于繼續(xù)高脂飲食組；而單純二甲雙胍治療組(繼續(xù)高脂飲食+二甲雙胍治療)大鼠的體重、血清ALT、TG、CHO顯著

9、低于繼續(xù)高脂飲食組，但降低大鼠肝重、LPC、瘦素、減輕肝細胞脂肪變性的作用不如普通飲食+二甲雙胍及普通飲食治療。④二甲雙胍治療后，sPLA2基因表達明顯下降，血清LPC水平亦明顯降低，二甲雙胍可能是通過調節(jié)sPLA2基因表達，降低血清LPC，減輕炎癥反應來發(fā)揮預防和治療NAFLD的作用。
　　 結論：⑴二甲雙胍對高脂飲食誘導大鼠NAFLD的發(fā)生有預防作用，與傳統(tǒng)護肝藥葫蘆素片相比，其效果更明顯，特別在改善血脂代謝及胰島素抵抗方面