PLA2-LPC途徑在肝細胞脂性凋亡中的機制研究.pdf

1、目的：
　　 探討PLA2/LPC途徑在FFAs致肝細胞脂性凋亡中的作用及分子機制。
　　 方法：
　　 常規(guī)培養(yǎng)張氏肝細胞,采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法觀察飽和脂肪酸(棕櫚酸,PA)和PLA2抑制劑作用18小時后細胞的增殖情況,用Hoechst33258染色和AnnexinV-PI染色流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡;尼羅紅染色檢測細胞內(nèi)脂質(zhì)含量;分別運用熒光定量PCR及Western-blot方法在mRNA水平及蛋白

2、水平檢測三種PLA2亞型(sPLA2、cPLA2、iPLA2)的表達,用生化反應(yīng)酶法檢測細胞中裂解液中LPC水平。
　　 結(jié)果：
　　 PA干預(yù)后的肝細胞細胞增殖抑制率隨PA作用時間延長、濃度增加而進行性增加,細胞凋亡明顯增加(P＜0.05);尼羅紅染色顯示PA并未引起細胞內(nèi)大量脂肪蓄積;PA誘導(dǎo)過程中,三種PLA2亞型表達明顯增加;且PA干預(yù)后肝細胞內(nèi)LPC含量增加。iPLA2特異性抑制劑(BEL),cPLA2特異性抑

3、制劑(AACOCF3)和sPLA2抑制劑(sPLA2-IIAInhibitorⅠ)分別與PA共孵育18小時后,細胞活性,細胞凋亡率較PA單獨孵育明顯改善。BEL、sPLA2-IIAInhibitorⅠ可使PA誘導(dǎo)的細胞內(nèi)LPC含量下降,而cPLA2特異性抑制劑AACOCF3對LPC含量無明顯影響。
　　 結(jié)論：
　　 PLA2/LPC途徑在游離脂肪酸致肝細胞脂性凋亡過程中起重要作用,其中PLA2是這一途徑的關(guān)鍵調(diào)控分子。