基于溫控雙水相萃取體系在蘆薈活性成份與手性化合物分離純化中的研究.pdf

1、論文以tritonX-114溫度誘導(dǎo)雙水相體系為基礎(chǔ)，系統(tǒng)的開(kāi)展了雙水相體系在蘆薈活性成分分離、手性分子識(shí)別等方面的研究工作。
　　 首先，以蘆薈多糖、蛋白質(zhì)為目標(biāo)分離物質(zhì)，研究了其在tritonX-114雙水相體系中的分配行為，探討了tritonX-114、pH值、溫度、添加劑等因素的影響。結(jié)果表明，當(dāng)tritonX-114濃度為4％，pH=3，溫度50℃，NaCl含量0.3mol/L時(shí)，能有效的對(duì)蘆薈多糖、蛋白質(zhì)進(jìn)行一次性分

2、離，并制備得蘆薈多糖粉末，IR、UV檢測(cè)結(jié)果確定所得物質(zhì)為蘆薈多糖，且不含蛋白質(zhì)；多糖抗氧化性研究結(jié)果顯示，雙水相體系制備所得蘆薈多糖對(duì)·OH、超氧自由基均具有良好的清除率，與醇沉淀法所得蘆薈多糖相比差異性顯著。
　　 其次，以蘆薈大黃素為研究對(duì)象，研究了其在雙水相體系中的分配行為，并考察了tritonX-114濃度、溫度、pH、電解質(zhì)添加劑等因素的影響，當(dāng)tritonX-114濃度為10％，溫度40℃，pH=3，無(wú)機(jī)鹽添加劑為

3、0.2mmol/L時(shí)，蘆薈大黃素在tritonX-114相的回收率達(dá)到最大。另外，試驗(yàn)采用溶液聚合法合成了poly(NIPAAM-co-AA)/EAA-β-CD溫敏性離子聚合物，采用紅外、核磁共振等手段對(duì)其進(jìn)行表征，并以此聚合物為添加劑，從雙水相體系中回收蘆薈蒽醌類物質(zhì)，分離得蘆薈蒽醌產(chǎn)品，產(chǎn)品HPLC色譜圖對(duì)比顯示，采用功能性添加劑純化后產(chǎn)品的純度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于蒽醌提取粗品和雙水相體系初步純化產(chǎn)品。
　　 第三，系統(tǒng)的研究了扁桃酸在

4、異丙醇/硫酸銨、異丙醇/磷酸氫二鉀、tritonX-114雙水相體中的分配行為，確定tritonX-114溫度誘導(dǎo)雙水相體系適合作為手性識(shí)別體系；以tritonX-114/L-酒石酸正戊酯、tritonX-114/L-酒石酸正戊酯/茶皂素、tritonX-114/β-環(huán)糊精三個(gè)識(shí)別體系對(duì)扁桃酸進(jìn)行手性識(shí)別，結(jié)果顯示tritonX-114/L-酒石酸正戊酯/茶皂素體系手性識(shí)別效果明顯，實(shí)驗(yàn)考察了體系中茶皂素含量、溫度、pH值等因素對(duì)體系手

5、性分離因子的影響，確定最佳分離體系為茶皂素含量0.51mmol、L-酒石酸正戊酯含量1.4mmol、pH=3、溫度55℃，最大分離因子達(dá)到1.29。
　　 第四，以溶劑法合成了環(huán)糊精-銅配合物，采用IR、UV、XRD等手段對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征，結(jié)果顯示環(huán)糊精.銅離子形成2:1的配合物；以環(huán)糊精-銅配合物為手性識(shí)別劑，在tritonX-114雙水相體系中對(duì)扁桃酸消旋體進(jìn)行手性識(shí)別與分離，考察了環(huán)糊精-銅配合濃度、pH、tritonX

6、-114濃度、溫度、鹽添加劑等因素對(duì)分離因子的影響。結(jié)果顯示：隨著pH、tritonX-114濃度、溫度、Cu2-β-CD濃度的增加，分離因子增大，當(dāng)Cu2-β-CD濃度為10mmol/L，溫度55℃時(shí)，體系分離因子達(dá)到5.05：NaCl、Na2SO4的加入對(duì)體系分離因子的影響隨著NaCl含量的增加，分離因子呈減小的趨勢(shì)，當(dāng)添加量為0.15mmol/L時(shí)，體系對(duì)扁桃酸幾乎已經(jīng)沒(méi)有了手性識(shí)別能力；Na2SO4的加入改變了扁桃酸在體系中的分

7、配行為，并破壞了Cu2-β-CD與扁桃酸之間的配位作用，使得體系沒(méi)有識(shí)別能力。
　　 第五，以β-CD及其衍生物為手性識(shí)別劑，探討了離子液體作用下體系對(duì)扁桃酸消旋體的手性識(shí)別。循環(huán)伏安法研究結(jié)果表明，在HP-β-CD和tritonX-114溶液介質(zhì)中添加一定量的離子液體，能有效的降低HP-β-CD對(duì)tritonX-114的包結(jié)作用，試驗(yàn)詳細(xì)的考察了識(shí)別劑濃度、tritonX-114濃度、pH、離子液濃度、溫度等因素對(duì)分離因子的影

8、響，當(dāng)tritonX-114濃度為6％時(shí)，分離因子隨著離子液濃度增加而增大，當(dāng)離子液濃度為0.3mmol/L時(shí)達(dá)到最大；手性識(shí)別體系的pH、溫度兩個(gè)因素對(duì)分離因子的影響很大，隨著pH、溫度的增加分離因子逐漸減小，且隨著溫度的增加體系手性識(shí)別機(jī)理沒(méi)有發(fā)生改變。
　　 最后，采用研磨法制備得HP-β-CD扁桃酸消旋體包結(jié)物，并通過(guò)IR、DSC等手段對(duì)其進(jìn)行表征，結(jié)果表明包結(jié)物的形成不是兩種單體的簡(jiǎn)單混合，而是扁桃酸消旋體中的苯環(huán)進(jìn)入

9、了HP-β-CD的疏水空腔；R、S-扁桃酸在HP-β-CD介質(zhì)中的紫外光譜掃描圖顯示，R、S扁桃酸的紫外吸收出現(xiàn)了規(guī)律性的紅移，且R-扁桃酸的紅移幅度要比S-扁桃酸大，說(shuō)明R-扁桃酸分子與HP-β-CD之間的作用力強(qiáng)于S-扁桃酸與HP-β-CD之間的作用力。根據(jù)Hildebrand-Benes計(jì)算得R、S-扁桃酸與HP-β-CD的穩(wěn)定常數(shù)分別為140和103，計(jì)算得立體選擇性為1.36，說(shuō)明主客之間包結(jié)作用的強(qiáng)弱是雙水相體系手性識(shí)別的根