四型肽精氨酸轉亞胺基酶在類風濕關節(jié)炎中的作用.pdf

1、類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)以多關節(jié)損傷和各種關節(jié)外炎癥表現(xiàn)為主要特征,是一種常見的具有較高致殘性的系統(tǒng)性自身免疫性疾病,其確切病因和發(fā)病機制至今尚不完全清楚,但一般認為它是多種遺傳因素和環(huán)境因素共同作用所導致的自身免疫性疾病。RA在自身免疫性結締組織病中其患病率居首位,全世界的患病率大約為1％。
　　 研究表明人類白細胞抗原(human leukocyte antigen,HIA)-DRB1基

2、因的多態(tài)性與RA的易感性有密切的關系,尤其攜帶共同表位(shared epitope,SE)基因復合子的人有高度危險性。近來發(fā)現(xiàn)環(huán)胍氨酸肽(Cyclic-citrullinated peptide,CCP)抗體對RA診斷有較高的敏感性和非常高的特異性。CCP抗體在RA的早期,甚至在RA發(fā)病前幾年就可被檢測到,提示CCP抗體在RA的發(fā)病機制中有重要作用。肽精氨酸轉亞胺基酶(Peptidylarginine deiminases,PADIs

3、)是一族翻譯后的修飾酶,能催化蛋白質中的精氨酸殘基轉變?yōu)殡野彼釟埢＝陙淼难芯堪l(fā)現(xiàn)PADI4與RA的易感性有關,并且在日本人群中發(fā)現(xiàn),PADI4基因多態(tài)性與RA發(fā)病的易感性有很強的相關性。
　　 本實驗主要研究:(1)通過特異性引物聚合酶鏈反應(PCR-SSP)技術對HLA-DRB1基因的SE表型進行分析;(2)采用ELISA法檢測CCP抗體,研究CCP抗體在RA中的診斷價值,并分析CCP抗體與SE表型和RF的關系;(3)應用

4、實時熒光定量RT-PCR技術,研究PADI4基因在RA患者的表達水平,并探討SE表型與PADI4基因表達水平的相關性;(4)通過對PADI4基因擴增產物進行測序,研究PADI4基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)與SE表型和RA的關系。
　　 結果顯示:(1)RA患者SE表型的陽性率(86.59％)明顯高于對照者(54.36％),并且RA患者SE純合子的陽性率(49.3

5、0％)明顯高于對照者(33.33％)。(2)CCP抗體的敏感性(82.93％)與RF(76.83％)無明顯差別,而特異性(97.99％)顯著高于RF(86.58％)。若CCP抗體同RF聯(lián)合檢測,則能提高RA診斷的敏感性,并且RA患者CCP抗體的出現(xiàn)與SE表型和RF沒有關系。(3)PADI4基因在RA患者體內的表達明顯高于正常人,其中表現(xiàn)型為SE陽性者表達顯著高于SE陰性者。(4)PADI4的4個SNPs基因(padi489、padi4_

6、90、padi4_92、padi4_104)的等位基因頻率存在明顯差異,并且當SE表型和PADI4的少見等位基因同時出現(xiàn)時的基因型與其他基因型存在明顯差異。
　　 以上結果提示:SE表型與RA發(fā)病有關,并且當SE表型為純合子時,RA的易感性增加。CCP抗體是一個特異性、敏感性均佳的RA實驗室診斷指標,具有廣泛的臨床應用前景,是一個有實際應用價值的實驗診斷指標,但SE表型與CCP抗體無關。此外,我們發(fā)現(xiàn)PADI4基因有可能是RA的