雷帕霉素通過(guò)調(diào)控mTOR信號(hào)通路及SIRT水平增加雌性大鼠的卵泡儲(chǔ)備和延長(zhǎng)卵巢壽命.pdf

1、研究目的:
　　觀察雷帕霉素(Rapamycin)對(duì)成年雌性大鼠各級(jí)卵泡發(fā)育及卵巢壽命的影響,并對(duì)mTOR信號(hào)通路及SIRT在其中的作用進(jìn)行探討。
　　材料與方法:
　　將16只雌性SD大鼠隨機(jī)分為:對(duì)照組和雷帕霉素干預(yù)組。雷帕霉素溶解在5.2％Tween-80和5.2%聚乙二醇400中。在正常攝食狀態(tài)下,雷帕霉素干預(yù)組每隔1天給予腹腔注射5mg/kg雷帕霉素+5.2%Tween-80和5.2%聚乙二醇400,對(duì)照組則

2、單純給予腹腔注射5.2%Tween-80和5.2%聚乙二醇400。
　　實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后每日行陰道涂片觀察大鼠動(dòng)情周期變化并記錄食物攝入量,每周監(jiān)測(cè)體重變化一次。實(shí)驗(yàn)第5周開(kāi)始進(jìn)行受孕實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)第10周,將大鼠麻醉后取卵巢稱(chēng)量重量,取卵巢組織進(jìn)行蘇木精-伊紅染色觀察各級(jí)卵泡并計(jì)數(shù),計(jì)算卵泡總數(shù)和各級(jí)卵泡數(shù)量占卵泡總數(shù)的百分比例。免疫組織化學(xué)染色觀察mTOR和P-P70S6K在卵泡中的表達(dá)和定位;通過(guò)蛋白免疫印跡技術(shù)來(lái)測(cè)量卵巢組織中mTO

3、R、P-P70S6K、SIRT1和SIRT6蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　進(jìn)食量統(tǒng)計(jì)結(jié)果:對(duì)照組大鼠的進(jìn)食量保持基本穩(wěn)定,平均21.3±1.0g/d/只;雷帕霉素干預(yù)組大鼠的進(jìn)食量平均14.2±0.6g/d/只,大約是對(duì)照組的67.1%(P<0.001)。
　　體重統(tǒng)計(jì)結(jié)果:對(duì)照組大鼠的體重在前4周逐漸增加,在第4周末統(tǒng)計(jì)時(shí)明顯比雷帕霉素干預(yù)組大鼠重(291.3±5.2g/只vs.269.5±6.2g/只,p<0.05

4、)。雷帕霉素干預(yù)組的體重從第4周到實(shí)驗(yàn)結(jié)束都沒(méi)有明顯改變,最終體重為255.5±11.3g/只;而對(duì)照組大鼠的體重為343.5±11.4g/只,明顯比雷帕霉素干預(yù)組大鼠重(P<0.001)。
　　卵巢重量統(tǒng)計(jì)結(jié)果:對(duì)照組大鼠的卵巢重量大約是雷帕霉素干預(yù)組組大鼠的2.5倍,分別為0.106±0.003gvs.0.047±0.014g(P<0.001).
　　動(dòng)情周期監(jiān)測(cè)和受孕實(shí)驗(yàn)結(jié)果:對(duì)照組大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中都表現(xiàn)出規(guī)則的動(dòng)

5、情周期,而且都能正常受孕。雷帕霉素干預(yù)組大鼠的動(dòng)情周期從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第4周就有25%(2/8)出現(xiàn)都不規(guī)則;第8周有87.5%(7/8)出現(xiàn)都不規(guī)則;到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)所有干預(yù)組大鼠的動(dòng)情周期都不規(guī)則,主要表現(xiàn)為動(dòng)情周期延長(zhǎng),而且都沒(méi)有任何大鼠受孕。
　　卵泡計(jì)數(shù)結(jié)果:雷帕霉素干預(yù)組大鼠原始卵泡數(shù)(132.5±13.7vs.63.4±6.2)是對(duì)照組的2倍多(P<0.001),而竇狀卵泡數(shù)和閉鎖卵泡數(shù)明顯低于對(duì)照組,分別為(28.5±3.2

6、vs.55.4±5.7,P<0.01)和(11.9±1.9vs.26.8±3.6,P<0.01)。
　　免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:mTOR和P-P70S6K在卵泡的胞漿表達(dá)明顯,而在顆粒細(xì)胞表達(dá)不明顯。
　　蛋白免疫印跡技術(shù)結(jié)果:雷帕霉素干預(yù)組卵巢組織中mTOR和P-P70S6K蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05),SIRT1和SIRT6蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　雷帕霉素能夠通過(guò)抑制m