戊四氮點燃腺苷A1受體敲除小鼠多藥轉(zhuǎn)運體的表達及其與COX-2的相關性研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：觀察腺苷A1 受體基因缺陷對PTZ 點燃小鼠癲癇發(fā)作及其腦組織病理形態(tài)學的影響，探討腺苷A1 受體與癲癇發(fā)作及神經(jīng)保護的關系。
　　 方法：將實驗小鼠分為敲除鼠組（腺苷A1 受體基因敲除小鼠，n=20只）、野生型組（C57BL/6 型普通小鼠，n=20只）和對照組（未接受PTZ 點燃的野生型小鼠，n=10只），采用PCR法對實驗小鼠進行基因鑒定并據(jù)此分組，觀察各組小鼠在PTZ 點燃過程中的癲癇發(fā)作情

2、況（死亡率、點燃率；點燃潛伏時間、發(fā)作開始時間、發(fā)作持續(xù)時間；癲癇發(fā)作級別的數(shù)量等），并在PTZ 點燃后不同時間點（24h,30d）處死小鼠，對其冰凍切片進行HE 染色和Nissl 染色觀察皮層和海馬的形態(tài)結構。
　　 結果：敲除鼠組死亡率和點燃率均顯著高于野生型組，兩組比較有顯著統(tǒng)計學差異；敲除鼠組點燃潛伏時間、發(fā)作開始時間明顯短于野生型組，發(fā)作持續(xù)時間明顯長于野生型組，兩組比較有顯著統(tǒng)計學差異；敲除鼠組癲癇發(fā)作程度明顯重于野

3、生型組。點燃后不同時間點動物腦組織病理形態(tài)學結果顯示敲除鼠組損傷較野生型組出現(xiàn)更早、范圍更廣泛、損傷程度更重。主要表現(xiàn)為早期反應性小膠質(zhì)細胞增生、細胞腫脹，晚期神經(jīng)細胞變性、壞死、異常增多的畸形膠質(zhì)細胞。
　　 結論：腺苷A1受體敲除鼠具有特殊的癲癇易感性，從側面證實腺苷A1受體在介導腺苷的抗癲癇機制中具有十分關鍵的作用；腺苷A1受體具有極強的腦保護作用，可減輕PTZ點燃過程中的腦組織形態(tài)結構損傷。
　　 第二部分

4、>　　 目的：觀察PTZ 點燃腺苷A1 受體敲除小鼠腦內(nèi)PGP、MRP1等MDTs的動態(tài)表達變化，評價腺苷A1 受體在難治性癲癇中的作用，為難治性癲癇的治療提供新的方向。
　　 方法：采用腹腔注射PTZ 制備慢性點燃癲癇模型，動物先分為野生型組（n=40只）和敲除鼠組（n=40只）兩組，再根據(jù)有無接受點燃及點燃后不同時間點又各自分為點燃前亞組、點燃后24h 亞組、點燃后7d 亞組、點燃后30d 亞組，采用RT-PCR法、免疫熒

5、光組織化學法觀察各組（亞組）小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1的表達情況。
　　 結果：PTZ 點燃后24h 時，野生型組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1的表達與點燃前比較無顯著統(tǒng)計學差異，敲除鼠組PGP、MRP1的表達顯著高于點燃前，差異有顯著統(tǒng)計學意義，兩組小鼠點燃后7d、30d 時PGP、MRP1的表達均顯著高于對照組；兩組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1的表達點燃后30d時顯著高于7d 時，點燃后7d 時顯著高于24

6、h 時，說明PTZ 點燃后PGP、MRP1的表達隨時間延長而增高；PTZ 點燃后同一時間點（點燃后24h、點燃后7d、點燃后30d）敲除鼠組PGP、MRP1的表達均顯著高于野生型組。
　　 結論：腺苷A1 受體激活可下調(diào)PGP、MRP1等MDTs的表達，推測腦內(nèi)腺苷局部給藥可能成為控制難治性癲癇的有效方法。
　　 第三部分
　　 目的：觀察塞來昔布對PTZ 點燃腺苷A1 受體敲除小鼠癲癇發(fā)作、腦組織病理形態(tài)學變化

7、及腦內(nèi)PGP、MRP1、COX-2表達的影響，分析COX-2與癲癇發(fā)作及神經(jīng)保護的關系，探討COX-2與癲癇耐藥性產(chǎn)生的相關性及其可能機制。
　　 方法：采用腹腔注射PTZ 制備慢性點燃癲癇模型，未接受PTZ 點燃的腺苷A1 受體敲除鼠為對照組（n=10只），接受PTZ 點燃的腺苷A1 受體敲除鼠根據(jù)是否給予塞來昔布預治療分為干預組（n=20只）和非干預組（n=20只）兩組，觀察各組小鼠在PTZ 點燃過程中的癲癇發(fā)作情況（點燃潛

8、伏時間、發(fā)作開始時間、發(fā)作持續(xù)時間）；再根據(jù)PTZ 點燃后不同時間點將干預組和非干預組兩組分別分為點燃后24h 亞組、點燃后30d亞組，采用HE 染色觀察各組（亞組）皮層和海馬的形態(tài)結構。采用RT-PCR法、免疫熒光組織化學法觀察各組（亞組）小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1、COX-2的表達情況。
　　 結果：干預組點燃潛伏時間、發(fā)作開始時間明顯長于非干預組，發(fā)作持續(xù)時間明顯短于非干預組，兩組比較均有顯著統(tǒng)計學差異。點燃后不同

9、時間點動物腦組織病理形態(tài)學結果顯示干預組皮層及海馬損傷程度較非干預組輕。點燃后24h 時，非干預組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1、COX-2表達顯著高于對照組，差異有顯著統(tǒng)計學意義，而干預組與對照組比較無顯著統(tǒng)計學差異，點燃后30d時，兩組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1、COX-2的表達顯著高于對照組；干預組和非干預組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1、COX-2的表達點燃后30d 時顯著高于24h 時，說明PTZ 點燃后COX