COX-PGE2-EP1信號通路參與脊髓ephrinBs-EphBs激活引起的痛覺過敏.pdf

1、目的: EphBs 受體及ephrinBs 配體存在于成年的大腦、脊髓及外周組織中，在各種生理和病理過程中具有重要的作用。我們及其他實(shí)驗(yàn)室的研究已經(jīng)證明脊髓水平ephrinBs/EphBs 信號參與傷害性信息調(diào)制及中樞敏感化，但其下游機(jī)制仍不清楚。本研究目的在于探討COX/PGE2/EP1 信號通路在脊髓水平ephrinBs/EphBs 激活引起的痛覺過敏中的作用。
　　 方法:
　　 1．觀察鞘內(nèi)注射ephrinB1-

2、Fc 對脊髓COX-1 和COX-2 表達(dá)的影響。①鞘內(nèi)注射ephrinB1-Fc(0.5μg，溶于5μl 生理鹽水中)，在注射后30 分鐘，1，2，4，8，24 小時(shí)用Western blot 方法檢測COX-1，COX-2 的表達(dá)，以探討ephrinB1-Fc 鞘內(nèi)注射后脊髓COX-1 和COX-2 表達(dá)的時(shí)間相。②鞘內(nèi)注射不同劑量ephrinB1-Fc(0.02，0.1，0.5 μg，溶于5μl 生理鹽水中)，選擇各自表達(dá)的高峰點(diǎn)

3、，觀察注射后8 小時(shí)COX-1 的表達(dá)和注射后2 小時(shí)COX-2 的表達(dá)，以探討ephrinB1-Fc 鞘內(nèi)注射后脊髓COX-1 和COX-2 表達(dá)的劑量依賴性。
　　 2. 抑制COX-1，COX-2 或阻斷EP1 受體對鞘內(nèi)注射ephrinB1-Fc 引起的熱痛覺過敏的影響。在鞘內(nèi)注射ephrinB1-Fc(0.5 μg，溶于5μl 生理鹽水中)前30 分鐘，鞘內(nèi)給予非選擇性COX 抑制劑酮鉻酸，COX-1 抑制劑SC-56

4、0(2μg，溶于5μl 生理鹽水中)或COX-2 抑制劑SC-58125(2μg，溶于5μl 生理鹽水中)或EP1 受體阻斷劑SC-19220(2μg，溶于5μl 生理鹽水中), 觀察注射后30 分鐘，1，2，4, 8，24 小時(shí)熱輻射縮足潛伏期的改變。
　　 3．抑制COX-1，COX--2 或阻斷EP1 受體對鞘內(nèi)注射ephrinB1-Fc 引起脊髓p-ERK和Fos 表達(dá)改變的影響。工具藥注射的劑量和時(shí)間點(diǎn)同2，采用Wes

5、tern blot 方法檢測ephrinB1-Fc 注射后30 分鐘p-ERK 的表達(dá),使用免疫熒光的方法檢測ephrinB1-Fc 注射后90 分鐘Fos 的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1．鞘內(nèi)注射EphB 受體激動(dòng)劑ephrinB1-Fc 后30 分鐘COX-1 蛋白的表達(dá)顯著減少，1 小時(shí)達(dá)最低點(diǎn)，注射后4 小時(shí)恢復(fù)到基線水平。在注射后8 小時(shí)的檢測時(shí)間點(diǎn)，COX-1 表達(dá)明顯增加并至少維持到注射后24 小時(shí)。CO

6、X-2 蛋白的表達(dá)在ephrinB1-Fc 注射后30 分鐘就開始增加，注射后2 小時(shí)達(dá)最高點(diǎn)，注射后4 小時(shí)恢復(fù)到基線水平。鞘內(nèi)給予不同劑量的ephrinB1-Fc (0.02, 0.1, 0.5μg 溶于5μl 生理鹽水中)，在各自表達(dá)增加的高峰時(shí)間點(diǎn)，即COX-1 在注射后8 小時(shí)，COX-2 在注射后2 小時(shí)，均呈劑量依賴性增加脊髓COX-1 和COX-2 的表達(dá)。
　　 2．鞘內(nèi)給予非選擇性COX 抑制劑酮鉻酸或COX

7、-1 抑制劑SC-560 或COX-2 抑制劑SC-58125 或EP1 受體阻斷劑SC-19220，均能抑制鞘內(nèi)注射ephrinB1-Fc 誘發(fā)的痛覺過敏。但在不同的時(shí)間點(diǎn)COX-1 抑制劑和COX-2 抑制劑效能有所不同。COX-2抑制劑在4 小時(shí)以內(nèi)有顯著作用，而COX-1 抑制劑在4 小時(shí)以后有顯著作用，非選擇性COX 抑制劑和EP1 受體阻斷劑在全程作用均有顯著作用。
　　 3．鞘內(nèi)注射ephrinB1-Fc 明顯增加