替普瑞酮大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:通過玻璃體腔注射NMDA制作大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷模型，觀察替普瑞酮對(duì)視網(wǎng)膜HSP70表達(dá)的影響，并觀察其對(duì)興奮性損傷視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有無(wú)保護(hù)作用。
　　 方法:Wistar大鼠50只按隨機(jī)原則分為4組，包括正常組（5只）、空白對(duì)照組（15只）和實(shí)驗(yàn)組（替普瑞酮腹腔注射組，30只），實(shí)驗(yàn)組按照注射藥量不同分為低劑量組（15只）和高劑量組（15只）。正常組大鼠不做任何處理，實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔注射替普瑞酮(200mg/Kg、800m

2、g/Kg)，空白對(duì)照組注射等量溶劑，注射藥物后1h空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠均隨機(jī)取一眼玻璃體腔注射2μl80mmol/lNMDA并做好標(biāo)記。并于造模后3h隨機(jī)處死相同數(shù)量的大鼠（各10只），用于檢測(cè)HSP70的表達(dá)，24h處死相同數(shù)量的大鼠（各5只），觀察RGCs的變化。同時(shí)正常對(duì)照組在1h時(shí)全部處死。免疫組織化學(xué)染色方法和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析各組視網(wǎng)膜HSP70的表達(dá)，甲苯胺藍(lán)染色計(jì)數(shù)各組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目。
　　 結(jié)

3、果:HE染色顯示正常組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，染色清晰?？瞻讓?duì)照組與低劑量組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目較正常大鼠明顯減少，細(xì)胞排列不規(guī)則，視網(wǎng)膜內(nèi)層萎縮，視網(wǎng)膜整體變薄。高劑量組大鼠視網(wǎng)膜損傷較空白對(duì)照組明顯減輕。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示，在正常組和空白對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜中只有微量的HSP70表達(dá)，低劑量組HSP70mRNA表達(dá)量較正常對(duì)照組稍有增加，高劑量組HSP70mRNA表達(dá)量明顯增加。免疫組織化學(xué)染色顯示替普瑞

4、酮能誘導(dǎo)HSP70在整個(gè)視網(wǎng)膜顯著表達(dá)，而正常組及空白對(duì)照組只見微量的HSP70棕黃色顆粒沉積于視網(wǎng)膜外層。免疫組織化學(xué)染色I(xiàn)OD值測(cè)定結(jié)果與熒光定量PCR結(jié)果相吻合。甲苯胺藍(lán)染色顯示正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列整齊，尼氏體染色清晰，空白對(duì)照組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目明顯減少，尼氏體減少甚至消失，低劑量組無(wú)明顯改善，高劑量組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷明顯減輕。
　　 結(jié)論:1.成功建立大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷模型;
　　 2.腹腔注射高劑量替普瑞酮