胰島素反饋調節(jié)小鼠胰腺β細胞系MIN6的mVGLUT2基因表達及其機制的初探.pdf

1、目的:
　　胰島素代償性分泌不足是2型糖尿病發(fā)生的重要原因，以谷氨酸作為信使分子的胰島素分泌系統(tǒng)是整個胰島素分泌機制中的重要組成部分，這一系統(tǒng)稱為谷氨酰胺能系統(tǒng)，而囊泡谷氨酸轉運子(VGLUT)將谷氨酸轉運至胰島素分泌囊泡的過程是胰島素分泌過程中的限速步驟。本文主要從胰島素反饋調節(jié)小鼠胰腺β細胞系MIN6細胞VGLUT2(mVGLUT2)基因表達調控入手，了解這一反饋調節(jié)機制在胰島素反饋調節(jié)小鼠胰腺β細胞功能中的作用，進一步探討這

2、個反饋調節(jié)作用在胰島素分泌過程中的影響及其在2型糖尿病發(fā)生發(fā)展過程中的意義。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)小鼠胰腺β細胞系MIN6細胞，然后以不同濃度的胰島素作用于MIN6細胞，分別以Real-time PCR和Western blot的方法檢測胰島素對mVGLUT2的轉錄和翻譯的調控情況，利用IR-siRNA、IRS1/2-siRNA干擾胰島素信號通路中參與因子（IR、IRS1、IRS2），觀察這些參與因子與mVGLUT2基因

3、表達的關系，分別以Real-time PCR和Western blot方法檢測采用RNA干擾(IR、IRS1、IRS2)后mVGLUT2基因的轉錄和翻譯的調控情況;最后用mVGLUT2-siRNA干擾MIN6細胞，并利用流式細胞技術檢測mVGLUT2被基因干擾后小鼠胰腺β細胞系MIN6細胞線粒體膜電位的變化。
　　結果:
　　胰島素在一定的濃度作用下抑制了mVGLUT2基因在RNA及蛋白質水平的表達，且這一反饋抑制只在特定的

4、時間點發(fā)生。采用RNA干擾技術干擾胰島素信號通路中的參與因子(IR、IRS1、IRS2)后，mVGLUT2基因在RNA及蛋白質水平的表達出現上調。MIN6細胞經mVGLUT2-siRNA干擾后其線粒體膜電位也出現降低。
　　結論:
　　無糖條件下胰島素在特定時間點抑制了VGLUT2基因的表達。利用RNA干擾技術干擾胰島素信號通路中的參與因子(IR、IRS1、IRS2)，mVGLUT2基因表達上調，提示胰島素通過其分泌通路對小